Telomere जी की अधिकता संरचना की परीक्षा ट्रायपैनोसोमा brucei</em
Summary
Telomeres गुणसूत्र स्थिरता के लिए आवश्यक हैं और telomere जी की अधिकता संरचना टेलोमिरेज की मध्यस्थता telomere रखरखाव के लिए आवश्यक है. हम हाल ही में telomere संरचना जी – अधिकता का पता लगाने के लिए दो तरीकों को अपनाया<em> ट्रायपैनोसोमा brucei</em> है, जो देशी जेल में संकरण और ligation मध्यस्थता प्राइमर विस्तार है, जो में वर्णित किया जा जाएगा रहे हैं.
Abstract
telomere संरचना जी की अधिकता खमीर, रीढ़, और ट्रायपैनोसोमा brucei सहित कई eukaryotes में पहचान की गई है. यह डी Novo telomere डीएनए संश्लेषण के लिए टेलोमिरेज के लिए सब्सट्रेट के रूप में में कार्य करता है और इसलिए telomere रखरखाव के लिए महत्वपूर्ण है टी.. brucei एक प्रोटोजोआ परजीवी है कि मनुष्यों और पशुओं में nagana में निद्रा रोग का कारण बनता है. एक बार संक्रमित स्तनधारी मेजबान, टी. brucei सेल नियमित रूप से इसकी सतह प्रतिजन स्विच करने के लिए मेजबान प्रतिरक्षा हमले से बचने के लिए. हमने हाल ही में दिखा दिया है कि टी. brucei telomere संरचना सतह प्रतिजन जीन की अभिव्यक्ति है, जो टी. के लिए महत्वपूर्ण है के नियमन में एक आवश्यक भूमिका निभाता है brucei रोगजनन. लेकिन, टी. brucei telomere संरचना बड़े पैमाने पर नहीं किया गया है इस विशेष संरचना के विश्लेषण के लिए तरीकों की सीमा की वजह से अध्ययन . अब हम सफलतापूर्वक संकरण और ligation की मध्यस्थता telomere जी की अधिकता संरचना की परीक्षा और टी. में telomere टर्मिनल के दृढ़ संकल्प nucleotide के लिए एक adapter ligation विधि के लिए प्राइमर विस्तार तरीकों जेल में देशी अपनाया brucei कोशिकाओं. यहाँ, हम विस्तार में प्रोटोकॉल का वर्णन है और अपने अलग फायदे और सीमाएं तुलना.
Protocol
Discussion
ट्रायपैनोसोमा brucei के मानव में बीमारी सो का कारण बनता है . यह रोग, अगर अनुपचारित छोड़ दिया, अनिवार्य रूप से घातक है टी.. स्तनधारी सेनाओं में brucei कोशिकाओं प्रतिजनी भिन्नता नियमित रूप से इतनी के रूप …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम वैज्ञानिक विचार – विमर्श और व्यावहारिक सुझाव के लिए डा. कैरोलिन मूल्य धन्यवाद देना चाहूंगा. इस काम NIH अनुदान AI066095 (: Bibo ली PI) के द्वारा समर्थित है.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| SeaKem LE Agarose | Lonza | 50004 | ||
| Agarose Type VII (low melting agarose) | Sigma | A4018 | ||
| Proteinase K, recombinant, PCR grade | Roche Diagnostic | 03 115801001 | ||
| Exo I | NEB | M0293 | ||
| Exo T | NEB | M0265 | ||
| T7 exonuclease | NEB | M0263 | ||
| T4 DNA polymerase | NEB | M0203 | ||
| QIAquick nucleotide removal kit | Qiagen | 28304 |
References
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