Quantificazione in situ di cellule beta pancreatiche Messa in topi
Summary
Il protocollo seguente delinea il processo di dissezione del pancreas per l'imaging fetta virtuale, e la successiva quantificazione di tutte le GFP-tagged beta-cellule del pancreas intero.
Abstract
Tracing cambiamenti di popolazioni di cellule specifiche in materia di salute e malattia è un obiettivo importante della ricerca biomedica. Il processo di monitoraggio pancreatiche beta-proliferazione delle cellule e la crescita delle isole è particolarmente impegnativo. Abbiamo sviluppato un metodo per catturare la distribuzione delle beta-cellule del pancreas intatto di topi transgenici con fluorescenza tag beta-cellule con una macro scritta per ImageJ (rsb.info.nih.gov / ij /). In seguito a dissezione del pancreas e di compensazione dei tessuti, il pancreas intero è catturata come una fetta virtuale, dopo di che la GFP-tagged beta-cellule sono esaminati. L'analisi include la quantificazione del totale delle cellule beta zona, il numero di isole pancreatiche e distribuzione delle dimensioni con riferimento a parametri specifici e le posizioni per ogni isola e per piccoli gruppi di beta-cellule. L'intera distribuzione delle isole possono essere tracciati in tre dimensioni, e le informazioni dalla distribuzione delle dimensioni e della forma di ogni isolotto consente un confronto quantitativo e qualitativo dei cambiamenti nella complessiva delle cellule beta zona a colpo d'occhio.
Protocol
Discussion
L'analisi delle immagini fetta virtuale di isole e cellule beta nel pancreas cluster intatto offre una grande vista l'intera distribuzione delle isolette. Sviluppi e cambiamenti nella distribuzione delle isole totale nel corso del tempo può quindi essere studiati e confrontati. Un esempio è dimostrato nella nostra analisi della formazione di isole pancreatiche (1). Un analisi completa delle neonatale pancreas topi in vari momenti (P1-P21) ha dimostrato che le isole sono formate da fissione. Mentre il beta-prol…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Lo studio è supportato da US Public Health Service Concessione DK-081527, 072473 e DK-DK-20595 per l'Università di Chicago Diabetes Centro di Ricerca e Formazione (Animal Models core), e un dono da parte della Fondazione Famiglia Kovler.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Forceps | Miltex | |||
| Scissors | F.S.T | 14001-13 | 01n2 | |
| Scissors | F.S.T | 14072-10 | 02s5 | |
| Large glass slide | Electron Microscopy Sciences | 71862-01 | 75x51x1.2mm | |
| Large cover glass | Ted Pella, Inc | 260462 | 50x75mm | |
| Glass Slide | Fisher Scientific | 12-550-15 | 25x75x1.0mm | |
| Cover glass | Fisher Scientific | 12-458-5M | 75x25mm | |
| Cover glass | Erie Scientific | 25mm circle | ||
| Fluorescent microscope | Olympus IX-81 | |||
| Dissection microscope | Olympus SZX12 | |||
| Stereo Investigator | MicroBrightField | |||
| MIP-GFP mice | Jackson Laboratory |
References
- Miller, K., Kim, A., Kilimnik, G., Moka, U., Jo, J., Periwal, V., Hara, M. Islet formation during the neonatal development in mice. PloS One. 4, E7739-E7739 (2009).
- Kilimnik, G., Kim, A., Jo, J., Miller, K., Hara, M. Quantification of pancreatic islet distribution in situ in mice. Am J Physiol Endocrinol Metab. 297, E1331-E1338 (2009).
- Hara, M., Wang, X., Kawamura, T., Bindokas, V. P., Dizon, R. F., Alcoser, S. Y., Magnuson, M. A., Bell, G. I. Transgenic mice with green fluorescent protein-labeled pancreatic beta -cells. Am J Physiol Endocrinol Metab. 284, E177-E183 (2003).
- Hara, M., Dizon, R. F., Glick, B. S., Lee, C. S., Kaestner, K. H., Piston, D. W., Bindokas, V. P. Imaging pancreatic beta-cells in the intact pancreas. Am J Physiol Endocrinol Metab. 290, E1041-E1047 (2006).
