Quantificação em situ da Missa das células beta pancreáticas em camundongos
Summary
O protocolo a seguir descreve o processo de dissecção pancreática para imagens fatia virtual, e posterior quantificação de todos os GFP-tagged células beta no pâncreas inteiro.
Abstract
Rastreamento alterações de populações de células específicas na saúde e na doença é um objetivo importante da pesquisa biomédica. O processo de proliferação de monitorização das células beta pancreáticas e crescimento das ilhotas é particularmente desafiador. Nós desenvolvemos um método para capturar a distribuição das células beta no pâncreas intacta de camundongos transgênicos com fluorescência marcadas beta-células com uma macro escrita para ImageJ (rsb.info.nih.gov / ij /). Após dissecção pancreática e limpeza de tecidos, o pâncreas inteiro é capturado como uma fatia virtual, após o que a GFP-tagged células-beta são examinados. A análise inclui a quantificação do total das células beta das ilhotas número área, e distribuição de tamanho com referência aos parâmetros e locais específicos para cada ilhota e para pequenos grupos de células-beta. Toda a distribuição das ilhotas podem ser plotados em três dimensões, e as informações a partir da distribuição do tamanho e da forma de cada ilhota permite uma comparação quantitativa e qualitativa das mudanças na área das células beta em geral num ápice.
Protocol
Discussion
A análise de imagens Slice Virtual de ilhotas e células beta no pâncreas aglomerados intacto fornece uma visão em grande escala de toda a distribuição das ilhotas. Desenvolvimentos e mudanças na distribuição total de ilhotas ao longo do tempo pode assim ser estudados e comparados. Um exemplo é demonstrado em nossa análise de formação de ilhotas pancreáticas (1). Uma análise abrangente da pancreata ratos neonatal em momentos diferentes (P1-P21) demonstrou que ilhotas são formadas por fissão. Enquanto a p…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
O estudo é apoiado por EUA Public Health Service Grant DK-081527, 072473 e DK-DK-20595 para a Universidade de Chicago Diabetes Centro de Pesquisa e Treinamento (Core modelos animais), e um presente da Fundação Família Kovler.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Forceps | Miltex | |||
| Scissors | F.S.T | 14001-13 | 01n2 | |
| Scissors | F.S.T | 14072-10 | 02s5 | |
| Large glass slide | Electron Microscopy Sciences | 71862-01 | 75x51x1.2mm | |
| Large cover glass | Ted Pella, Inc | 260462 | 50x75mm | |
| Glass Slide | Fisher Scientific | 12-550-15 | 25x75x1.0mm | |
| Cover glass | Fisher Scientific | 12-458-5M | 75x25mm | |
| Cover glass | Erie Scientific | 25mm circle | ||
| Fluorescent microscope | Olympus IX-81 | |||
| Dissection microscope | Olympus SZX12 | |||
| Stereo Investigator | MicroBrightField | |||
| MIP-GFP mice | Jackson Laboratory |
References
- Miller, K., Kim, A., Kilimnik, G., Moka, U., Jo, J., Periwal, V., Hara, M. Islet formation during the neonatal development in mice. PloS One. 4, E7739-E7739 (2009).
- Kilimnik, G., Kim, A., Jo, J., Miller, K., Hara, M. Quantification of pancreatic islet distribution in situ in mice. Am J Physiol Endocrinol Metab. 297, E1331-E1338 (2009).
- Hara, M., Wang, X., Kawamura, T., Bindokas, V. P., Dizon, R. F., Alcoser, S. Y., Magnuson, M. A., Bell, G. I. Transgenic mice with green fluorescent protein-labeled pancreatic beta -cells. Am J Physiol Endocrinol Metab. 284, E177-E183 (2003).
- Hara, M., Dizon, R. F., Glick, B. S., Lee, C. S., Kaestner, K. H., Piston, D. W., Bindokas, V. P. Imaging pancreatic beta-cells in the intact pancreas. Am J Physiol Endocrinol Metab. 290, E1041-E1047 (2006).
