Het isoleren van volwassen stamcellen uit spier-en zachte weefsels op basis van de cel naleving snelheid kolf.
Volwassen stamcellen zijn al lang besproken met betrekking tot de toepassing ervan in regeneratieve geneeskunde. Volwassen stamcellen hebben geleid tot een veel opwinding voor de behandeling van gewonde en zieke weefsels als gevolg van hun indrukwekkende mogelijkheden om multi-lijn celdifferentiatie en hun zelf-vernieuwing kunnen ondergaan. Het belangrijkste is, hebben deze eigenschappen hen voordelig voor gebruik in de autologe stamceltransplantatie therapieën. Het huidige protocol zal introduceren de lezers op de gewijzigde preplate techniek waarbij zachte weefsels van het bewegingsapparaat, zoals pees-en spier, zijn een<sup> St</sup> Enzymatisch los en vervolgens geplaatst in collageen gecoat kolven met medium. De bovenstaande vloeistof, die is samengesteld uit medium en de resterende drijvende cellen, is serieel overgedragen dagelijks naar nieuwe flessen. De stamcellen zijn de langzaamste zich te houden aan de kolven die meestal duurt 5-7 dagen (serieel transfers of preplates). Door gebruik te maken van deze techniek, volwassen stamcellen aanwezig in deze weefsels kunnen gemakkelijk worden geoogst door middel van vrij niet-invasieve procedures.
Het is bekend dat sommige volwassen weefsels meerdere stamcellen bevatten. In de afgelopen jaren van studie, zijn stamcellen aangetroffen in de zachte musculoskeletale weefsels, waaronder skeletspier en pezen. Deze huidige protocol details een procedure, die bekend staat als de gewijzigde preplate techniek, die met succes is gebruikt in ons laboratorium om volwassen stamcellen uit pezen en skeletspieren te isoleren. Met behulp van de gewijzigde preplate beschreven techniek boven de cellen kunnen worden onderverdeeld in …
The authors have nothing to disclose.
De auteurs zijn zeer erkentelijk voor mevrouw Haiying Pan en de heer Ian Bellayr voor hun technische hulp op celisolatie voor de huidige films en de heer Kyle Holden en de heer Jonathan Lucas voor hun hulp op dia bewerken. Veel dank aan de volgende lijst van personen die betrokken zijn geweest bij de ontwikkeling van de gewijzigde preplate technieken die de afgelopen jaren: Drs. Burhan Gharaibeh, Baohong Cao, Deasy Bridget, Thomas R. Payne, Aiping Lu, Hairong Peng, Hideki Oshima, Bo Zeng, Xiaodong Mu, Kimimasa Tobita, Ron Jankowski, Makato Ikezawa. We zijn dankbaar voor de technische bijstand van James H. Cummins, Ryan Pruchnic, Joseph Feduska, Rebecca C. Schugar, Haiying Pan en Jessica Tebbets. De auteur zou ook graag de financiële steun voor dit werk erkennen van de spierdystrofie Association (MDA), de National Institutes of Health (NIH), het Department of Defense (DOD), van de Children's Hospital van Pittsburgh van UPMC, het Ministerie van orthopedische chirurgie, en de Universiteit van Pittsburgh.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
DMEM | Invitrogen | #11995-073 | ||
FBS | Invitrogen | #10437-028 | ||
Heat-inactivated horse serum | Invitrogen | #26050-088 | ||
Chick embryo extract | Accurate Chemical | #CE650T-10 | ||
100U ml penicillin/streptomycin | Invitrogen | #15140-122 | ||
Dulbecco’s PBS | Invitrogen | #14190-250 | ||
Hank’s Buffered Salt Solution | Invitrogen | #24020-117 | ||
Collagenase type XI 0.2%(wt/vol) | Sigma-Aldrich | #C7657 | ||
Dispase2.4U ml | Invitrogen | #17105-041 | ||
Trypsin-EDTA0.5%(wt/vol) (10x;5g liter trypsin (1:250) | Invitrogen | #15400-054 | ||
Collagen for coating flask : Type I collagen derived from calf skin 0.1 g liter | Sigma-Aldrich | #C-9791 | ||
DMSO | Sigma | #D-2650 |