عزل الخلايا الجذعية من أنسجة العظام والعضلات الناعمة
Summary
عزل الخلايا الجذعية من الأنسجة العضلية الناعمة على أساس سرعة الانضمام إلى الخلية القارورة.
Abstract
منذ فترة طويلة الخلايا الجذعية البالغة التي نوقشت في ما يخص تطبيقها في مجال الطب التجديدي. لقد ولدت الخلايا الجذعية للبالغين قدرا كبيرا من الإثارة لعلاج الجرحى والأنسجة المريضة بسبب قدراتها على الخضوع للإعجاب متعددة النسب تمايز الخلايا وقدرتها على التجدد الذاتي. الأهم من ذلك ، جعلت هذه الصفات من المفيد لهم لاستخدامها في علاجات ذاتي زرع الخلايا. والبروتوكول الحالي يعرض القراء إلى تقنية تعديل preplate حيث الأنسجة الرخوة في الجهاز الحركي ، مثل الأوتار والعضلات ، هي 1<sup> ش</sup> نأت إنزيمي ثم يوضع في قوارير الكولاجين المغلفة مع المتوسط. يتم نقل متسلسل وطاف ، والذي يتكون من المتوسط والخلايا المتبقية العائمة ، يوميا لقوارير جديدة. الخلايا الجذعية هي الأبطأ التمسك القوارير التي عادة ما يستغرق 5-7 أيام (أو نقل المسلسل preplates). ويمكن باستخدام هذه التقنية ، والخلايا الجذعية البالغة الموجودة في هذه الأنسجة حصادها بسهولة من خلال إجراءات غير الغازية إلى حد ما.
Protocol
Discussion
وقد تم الاعتراف بأن بعض أنسجة البالغين تحتوي على خلايا جذعية متعددة. على مدى السنوات القليلة الماضية من الدراسة ، وقد تم الكشف عن الخلايا الجذعية في الأنسجة العضلية الناعمة لل، بما في ذلك الهيكل العظمي والعضلات والأوتار. هذا البروتوكول الحالي تفاصيل إجراء ، والمعرو?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
المؤلفون ممتنون كثيرا من السيدة هاى يينغ بان والسيد إيان Bellayr لما قدموه من مساعدة تقنية على عزل خلية للأفلام الحالي ، والسيد كايل هولدن والسيد جوناثان لوكاس لمساعدتهم على تحرير الشريحة. جزيل الشكر إلى القائمة التالية للأشخاص الذين تورطوا مع تطور التقنيات preplate تعديل على مدى السنوات الماضية : الدكاترة. برهان غرايبة ، تساو BaoHong ، بريدجيت Deasy ، توماس باين R. ، لو اى بينغ ، Hairong بنغ ، هيديكي أوشيما ، بو تسنغ شياو دونغ مو ، Kimimasa Tobita رون يانكوفسكي ، Makato Ikezawa. نحن ممتنون للمساعدة التقنية من جيمس H. الكمون ، Pruchnic ريان ، Feduska جوزيف ، ريبيكا Schugar جيم ، وعموم هاى يينغ وTebbets جيسيكا. المؤلف كما يود أن نعترف بالدعم المالي لهذا العمل من رابطة الضمور العضلي (MDA) ، والمعاهد الوطنية للصحة (NIH) ، وزارة الدفاع (DOD) ، مستشفى الأطفال في بيتسبرغ من UPMC ، وإدارة جراحة العظام ، وجامعة بيتسبرغ.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | #11995-073 | ||
| FBS | Invitrogen | #10437-028 | ||
| Heat-inactivated horse serum | Invitrogen | #26050-088 | ||
| Chick embryo extract | Accurate Chemical | #CE650T-10 | ||
| 100U ml penicillin/streptomycin | Invitrogen | #15140-122 | ||
| Dulbecco’s PBS | Invitrogen | #14190-250 | ||
| Hank’s Buffered Salt Solution | Invitrogen | #24020-117 | ||
| Collagenase type XI 0.2%(wt/vol) | Sigma-Aldrich | #C7657 | ||
| Dispase2.4U ml | Invitrogen | #17105-041 | ||
| Trypsin-EDTA0.5%(wt/vol) (10x;5g liter trypsin (1:250) | Invitrogen | #15400-054 | ||
| Collagen for coating flask : Type I collagen derived from calf skin 0.1 g liter | Sigma-Aldrich | #C-9791 | ||
| DMSO | Sigma | #D-2650 |
References
- Gharaibeh, B. Isolation of a slowly adhering cell fraction containing stem cells from murine skeletal muscle by the preplate technique. Nat Protoc. 3, 1501-1509 (2008).
- Qu-Petersen, Z. Identification of a novel population of muscle stem cells in mice: potential for muscle regeneration. J Cell Biol. 157, 851-864 (2002).
- Li, Y. &. a. m. p. ;. a. m. p., Huard, J. Differentiation of muscle-derived cells into myofibroblasts in injured skeletal muscle. Am J Pathol. 161, 895-907 (2002).
- Watt, D. J., Lambert, K., Morgan, J. E., Partridge, T. A. &. a. m. p. ;. a. m. p., Sloper, J. C. Incorporation of donor muscle precursor cells into an area of muscle regeneration in the host mouse. J Neurol Sci. 57, 319-331 (1982).
- Lu, A. Isolation of myogenic progenitor populations from Pax7-deficient skeletal muscle based on adhesion characteristics. Gene Ther. 15, 1116-1125 (2008).
- Lee, J. Y. Clonal isolation of muscle-derived cells capable of enhancing muscle regeneration and bone healing. J Cell Biol. 150, 1085-1100 (2000).
- Cao, B. The role of receptors in the maturation-dependent adenoviral transduction of myofibers. Gene Ther. 8, 627-637 (2001).
- Cao, B. Muscle stem cells differentiate into haematopoietic lineages but retain myogenic potential. Nat Cell Biol. 5, 640-646 (2003).
- Huard, J. Regenerative medicine based on muscle stem cells. J Musculoskelet Neuronal Interact. 8, (2008).
- Gates, C. B., Karthikeyan, T., Fu, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Huard, J. Regenerative medicine for the musculoskeletal system based on muscle-derived stem cells. J Am Acad Orthop Surg. 16, 68-76 (2008).
