בידוד בתאי גזע רקמות השלד והשרירים Soft
Summary
בידוד גזע בוגרים תאים ברקמות הרכות השלד מבוסס על מהירות הדבקות של התא בקבוק.
Abstract
בתאי גזע בוגרים כבר מזמן דנו לגבי היישום שלהם ברפואה רגנרטיבית. בתאי גזע בוגרים יצרו מידה רבה של התרגשות לטיפול רקמות פצועים וחולים בגלל היכולות המרשימות שלהם לעבור רב השושלת התמיינות תאים ויכולת התחדשות עצמית שלהם. והכי חשוב, התכונות הללו הפכו אותם יתרון לשימוש טיפולים עצמיים השתלת תאים. הפרוטוקול הנוכחי יהיה להכניס את הקוראים לטכניקה preplate שונה שבו הרקמות הרכות של מערכת השלד, שריר גיד למשל ואת, הם 1<sup> רחוב</sup> ניתק enzymatically ואז להציב צלוחיות קולגן מצופה בינוני. Supernatant, המורכבת בינוני התאים הצפים הנותרים, מועבר סדרתי היומי צלוחיות חדשות. בתאי גזע האיטי ביותר לדבוק צלוחיות אשר בדרך כלל לוקח 5-7 ימים (העברות סדרתי או preplates). באמצעות טכניקה זו, בתאי גזע בוגרים הנמצאים ברקמות אלה ניתן לקצור בקלות דרך למדי פולשני ההליכים.
Protocol
Discussion
זה כבר הכיר בכך כמה רקמות בוגרות מכילים בתאי גזע מרובים. במהלך השנים האחרונות של המחקר, בתאי גזע זוהו ברקמות השלד רך, כולל שריר גיד השלד. זה פרוטוקול הנוכחית פרטים הליך המכונה הטכניקה preplate שונה, כי שימש בהצלחה במעבדה שלנו לבודד בתאי גזע בוגרים של גידים שרירי השלד. באמצ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
החוקרים מעריכים מאוד של גב 'Haiying פאן מר איאן Bellayr לעזרה הטכנית שלהם על בידוד התא הסרטים הנוכחי מר קייל הולדן ומר יונתן לוקאס על עזרתם על עריכת שקופיות. תודה רבה על הרשימה הבאה של אנשים שהיו מעורבים בפיתוח של טכניקות preplate השתנה בשנים האחרונות: בני הזוג. בורהאן Gharaibeh, BaoHong קאו, דיזי ברידג'ט, תומס ר 'פיין, Aiping לו, Hairong פנג, הידקי אושימה, בו זנג, Xiaodong מו, Kimimasa Tobita, רון ינקובסקי, Makato Ikezawa. אנו אסירי תודה על הסיוע הטכני של ג'יימס ה 'Cummins, ריאן Pruchnic, יוסף Feduska, רבקה ג Schugar, Haiying פאן וג'סיקה Tebbets. המחבר גם רוצה להכיר תמיכה כספית עבור עבודה זו מפני ניוון האגודה שרירים (מד"א), המכון הלאומי לבריאות (NIH), משרד ההגנה (DOD), בית החולים לילדים של פיטסבורג של UPMC, המחלקה ניתוח אורתופדי, של אוניברסיטת פיטסבורג.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | #11995-073 | ||
| FBS | Invitrogen | #10437-028 | ||
| Heat-inactivated horse serum | Invitrogen | #26050-088 | ||
| Chick embryo extract | Accurate Chemical | #CE650T-10 | ||
| 100U ml penicillin/streptomycin | Invitrogen | #15140-122 | ||
| Dulbecco’s PBS | Invitrogen | #14190-250 | ||
| Hank’s Buffered Salt Solution | Invitrogen | #24020-117 | ||
| Collagenase type XI 0.2%(wt/vol) | Sigma-Aldrich | #C7657 | ||
| Dispase2.4U ml | Invitrogen | #17105-041 | ||
| Trypsin-EDTA0.5%(wt/vol) (10x;5g liter trypsin (1:250) | Invitrogen | #15400-054 | ||
| Collagen for coating flask : Type I collagen derived from calf skin 0.1 g liter | Sigma-Aldrich | #C-9791 | ||
| DMSO | Sigma | #D-2650 |
References
- Gharaibeh, B. Isolation of a slowly adhering cell fraction containing stem cells from murine skeletal muscle by the preplate technique. Nat Protoc. 3, 1501-1509 (2008).
- Qu-Petersen, Z. Identification of a novel population of muscle stem cells in mice: potential for muscle regeneration. J Cell Biol. 157, 851-864 (2002).
- Li, Y. &. a. m. p. ;. a. m. p., Huard, J. Differentiation of muscle-derived cells into myofibroblasts in injured skeletal muscle. Am J Pathol. 161, 895-907 (2002).
- Watt, D. J., Lambert, K., Morgan, J. E., Partridge, T. A. &. a. m. p. ;. a. m. p., Sloper, J. C. Incorporation of donor muscle precursor cells into an area of muscle regeneration in the host mouse. J Neurol Sci. 57, 319-331 (1982).
- Lu, A. Isolation of myogenic progenitor populations from Pax7-deficient skeletal muscle based on adhesion characteristics. Gene Ther. 15, 1116-1125 (2008).
- Lee, J. Y. Clonal isolation of muscle-derived cells capable of enhancing muscle regeneration and bone healing. J Cell Biol. 150, 1085-1100 (2000).
- Cao, B. The role of receptors in the maturation-dependent adenoviral transduction of myofibers. Gene Ther. 8, 627-637 (2001).
- Cao, B. Muscle stem cells differentiate into haematopoietic lineages but retain myogenic potential. Nat Cell Biol. 5, 640-646 (2003).
- Huard, J. Regenerative medicine based on muscle stem cells. J Musculoskelet Neuronal Interact. 8, (2008).
- Gates, C. B., Karthikeyan, T., Fu, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Huard, J. Regenerative medicine for the musculoskeletal system based on muscle-derived stem cells. J Am Acad Orthop Surg. 16, 68-76 (2008).
