파라핀에 성체 초파리 머리 삽입: 조직학을 위한 조직 준비

초록

출처: Sunderhaus, E. R., Kretzschmar, D. Mass Histology to Quantify Neurodegeneration in Drosophila . J. Vis. 특급 (2016).

이 비디오는 연속 절편을 위해 플라이 헤드를 준비하는 기술인 칼라 방법을 사용하여 초파리 머리를 파라핀에 삽입하는 방법을 설명합니다. 파라핀 절편은 뇌의 해부학적 구조에 대한 조직학적 검사와 신경 퇴행의 평가에 사용됩니다. 주요 프로토콜은 한 번의 제처리에서 여러 파리를 처리할 수 있는 방법을 보여 줌으로써 시간 효율성을 높이고 실험 아티팩트를 최소화합니다.

프로토콜

이 프로토콜은 Sunderhaus and Kretzschmar, Mass Histology to Quantify Neurodegeneration in Drosophila, J. Vis. Exp. (2016)에서 발췌

한 것입니다.

1. 칼라에 머리를 고정하고 파라핀에 삽입하기

참고: 고정 과정의 모든 단계는 흄 후드에서 수행해야 합니다. 메틸벤조에이트는 건강에 위험을 초래하지는 않지만 매우 뚜렷한 냄새가 있어 흄 후드에서 취급하지 않으면 압도적일 수 있습니다.

1. 파리를 마취하기 전에 99% 에탄올 30mL에 클로로포름 5mL와 빙초산 5mL를 첨가하여 50mL의 Carnoy 용액을 구성합니다(클로로포름과 아세트산을 혼합하지 마십시오). 결정화 접시와 같이 바닥이 평평한 유리 용기에 붓고 칼라가 평평하게 놓일 수 있고 용액으로 완전히 덮일 수 있도록 합니다.
2. CO₂ 또는 에테르로 파리를 마취하십시오.
3. 집게를 사용하여 목으로 파리 (대부분의 칼라로 최대 20 마리)를 칼라에....

결과

그림 1: 파라핀 시리얼 섹션. A) 칼라 방법을 사용하여 실험 및 대조 플라이를 하나의 칼라에 끼워 하나의 샘플로 처리할 수 있습니다. 눈이 없는 사인 알파리는 방향(화살표)을 위해 삽입됩니다. B) 칼라에서 플라이 헤드의 방향을 보여주는 개략도. C) 이 이미지에서 다른 플라이 헤드의 섹션은 슬라이드에서 왼쪽에서 오른쪽으로 향하고 있습니다. 슬라이드의 위에서 아래로, 동일한 플라이 헤드의 연속적인 단면을 볼 수 있습니다. 이 경우, 사인 오큘리스 플라이(sine oculis fly)가 위치 3(화살표)에 삽입되었습니다. 단면은 절단 후 단면을 씻어내는 형광 눈 색소에 의해 얼룩집니다. A = 5mm 및 C = 0.5mm의 스케일 바.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
칼라	제네시 사이언티픽	재질 보기 TS 48-100	우리는 Genesee의 것과 같이 레이어 대신 하나의 금속 조각으로 만든 맞춤형 목걸이를 사용하고 있습니다.
임베딩용 고무 아이스 큐브 트레이	가정용품점		크기는 추가 벽에 접착하여 맞출 수 있습니다
결정화 접시	피셔 사이언티픽 컴퍼니	08-762-3
에테르	피셔 사이언티픽 컴퍼니	재질 보기 E138-1
에탄올	Decon 연구소 Inc.	2701
담즙 형성	피셔 사이언티픽 컴퍼니	C298-500
빙하 아세트산	피셔 사이언티픽 컴퍼니	대답 38-212
메틸벤조에이트	피셔 사이언티픽 컴퍼니	M205-500	뚜렷한 냄새 - 흄 후드에 사용하십시오!
낮은 융점 파라핀 왁스	피셔 사이언티픽 컴퍼니	T565	65°C 수조에서 여분의 용융을 유지하십시오

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