Caenorhabditis elegans의 단일 세포 해리: 살아있는 세포를 분리하는 방법

초록

출처: Germany, E. M., et al. 회충 Caenorhabditis elegans에서 특정 뉴런 개체군의 격리. J. Vis. 특급 (2019).

이 동영상은 전체 벌레를 온전한 세포의 FACS 또는 면역침전에 적합한 단일 세포 현탁액으로 해리하는 방법을 설명합니다.

프로토콜

이 프로토콜은 Germany et al, Isolation of Specific Neuron Populations from Roundworm Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp.(2019).

1. 세포 분리를 위한 노화된 벌레의 준비 및 수집

참고: 아래에 설명된 내용은 미네소타 대학의 CGC(Caenorhabditis Genetics Center) 균주 저장소에서 얻은 형질전환 unc-17::GFP 균주(OH13083)에서 콜린성 뉴런을 분리한 것입니다. 곰팡이나 박테리아로 인한 오염을 방지하기 위해 멸균 상태를 유지하는 것이 필수적입니다.

1. T. Stiernagle이 설명한 표백 방법을 통해 웜을 준비하고 동기화합니다. 노화 실험의 경우 25μM의 플루오로데옥....

재료

<표 테두리="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:753px;" width="753"> 이 논문에 사용된 재료 목록 이름 회사 카탈로그 번호 댓글 한천, 분자 생물학 학년 VWR A0930 CaCl2 시그마 C5670 (영문) Contess 자동 셀 카운터 인비트로젠 Z359629 DTT USB생물학 D8070 FBS 오메가 사이언티픽 FB-02 (영어) 플루오로 데 옥시 우리딘 시그마 F0503 헤페스 시그마 H3375 (영문) KCl 암레스코 O395 KH2PO4 USB생물학 P5110 Leibovitz의 L-15 미디엄 지브코 21083027 MgCl2 시그마 M8266 MgSO4 USB생물학 엠2090 Na2HPO4·7H2O USB생물학 S5199 NaCl 폭스바겐 X190 NaOCl (표백제) 클로록스 페니실린 - 스트렙토 마이센 피셔 사이언티픽 15140122 프로나세 E 시그마 7433 Streptomyces griseus에서 프로테아제 혼합물 SDS 암레스코 O227 SMT1-FLQC 형광 실체현미경 트라이텍 연구 설탕 USB생물학 S8010