UV 조사: 염색체 외 배열을 통합하는 방법

초록

출처: Mariol, M. C et al. 높은 투과 속도를 가진 염색체 외 어레이를 C. elegans 게놈에 통합하기 위한 빠른 프로토콜.J. Vis. 특급(2013).

전이유전자의 미세주입은 일반적으로 큰 염색체 외 배열을 가진 C. elegans 균주를 초래하며, 이는 전이유전자의 다양한 발현 및 전달을 초래합니다. UV 방사선 조사는 어레이의 염색체 통합과 보다 안정적인 전이유전자 전달을 유도할 수 있습니다.

프로토콜

이 프로토콜은 Mariol et al, 높은 전송 속도를 가진 염색체 외 배열을 C. elegans 게놈에 통합하기 위한 빠른 프로토콜, J. Vis. Exp.(2013).

1. 형질전환 웜의 UV 조사 및 복구

1. 벌레 조사:
   1. 30-100마리의 형광 형질전환 L4 동물을 별도의 배양 플레이트에 넣습니다(플레이트당 15-20
   마리).
   2. 뚜껑을 제거한 상태로 플레이트를 UV 가교기에 놓습니다. 0.012 J/cm²에서 벌레를 조사합니다. 변형률은 UV에 다소 민감하며 결과는 사용된 UV 조사기에 따라 달라질 수 있습니다. 0.010-0.015 J / cm² 사이의 선량 범위를 테스트 할 수 있습니다.
2. 방사선 조사 후 웜 복구:
   1. 방사선 조사된 벌레가 담긴 플레이트....

결과

표 1. C. elegans 게놈에 염색체 외 배열 통합을 위한 표준 프로토콜과 개선된 프로토콜의 비교.거의 동일한 빈도로 전달되는 2개의 통합되지 않은 전이유전자는 표준 또는 개선된 프로토콜을 사용하여 통합되었습니다. 가장 큰 차이점은 표준 프로토콜에서 모든 F1 플레이트의 자손 스크리닝을 수행하여 형질전환 F2 웜의 비율을 추정한다는 사실에 있으며, 이는 ≥ 75%여야 합니다. 이 단계는 특히 초기 전송 속도가 75%에 가까운 경우 시간이 오래 걸립니다. 개선된 프로토콜에서는 형질전환 F2 동물을 운반하는 각 F1 플레이트에서 4개의 F2 웜을 선별하고 자손(F3)에서 형질전환 웜을 100% 스크리닝하는 것으로 충분하며, 이는 신속하게 수행될 수 .......

재료

<표 테두리="0" cellpadding="0" cellspacing="0" 스타일="너비:580px;" 너비="579"> 이 논문에 사용된 재료 목록 이름 회사 카탈로그 번호 댓글 U.V. 크로스 링커 피셔 사이언티픽 파장 254nm 현미경 SteREO 디스커버리 V8 칼 자이스, Inc. 페트리 접시, 60mm 씨엠엘 BPS55E6 플라티늄 와이어 0.25mm 알파 에자르 7440년 6월 4일 지렁이를 고르려면