मानव टी लिम्फोसाइट अलगाव, और प्रवासन की संस्कृति विश्लेषण इन विट्रो में</em
Summary
टी लिम्फोसाइट प्रवास lymphoid अंगों, vasculature से बाहर निकलने के लिए घर वापस आना के दौरान होता है, और परिधि के ऊतकों में प्रवेश. यहाँ, हम एक प्रोटोकॉल है कि टी लिम्फोसाइट प्रवास विश्लेषण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता का वर्णन<em> इन विट्रो में</em>.
Abstract
टी lymphocytes के प्रवास कोशिका की सतह integrins के अन्य कोशिकाओं पर या बाह्य मैट्रिक्स प्रोटीन के साथ व्यक्त ligands के साथ चिपकने वाला बातचीत शामिल है. सटीक integrins spatiotemporal एक कम आत्मीयता राज्य से सेल के अग्रणी धार पर एक उच्च आत्मीयता राज्य के लिए सक्रियण टी लिम्फोसाइट प्रवास के लिए महत्वपूर्ण है<sup> 1</sup>. इसी तरह, सेल अनुगामी किनारे का त्याग, या uropod लगातार integrin निर्भर टी लिम्फोसाइट गतिशीलता को बनाए रखने में एक आवश्यक कदम है<sup2></sup>. एक साधन के रूप में autoimmune या भड़काऊ रोगों लक्ष्य integrins करने के लिए कई चिकित्सकीय दृष्टिकोण अत्यधिक और leukocytes की भर्ती प्रवास को रोकना<sup> 3</sup>. आणविक घटनाओं है कि मानव टी लिम्फोसाइट प्रवास को विनियमित का अध्ययन करने के लिए, हम एक का उपयोग किया है<em> इन विट्रो में</em> सिस्टम के लिए दो आयामी है कि वातावरण है कि एक टी लिम्फोसाइट vasculature से भर्ती के दौरान मुठभेड़ों mimics एक सब्सट्रेट पर सेल प्रवास का विश्लेषण. टी lymphocytes पहले मानव दाताओं से अलग कर रहे हैं और कर रहे हैं तो उत्तेजित और सात से दस दिनों के लिए सभ्य. परख के दौरान, टी lymphocytes का पालन करें और कहनेवाला आसंजन अणु – 1 (ICAM-1), integrin LFA-1 के लिए एक ligand, और stromal सेल व्युत्पन्न कारक 1 (एसडीएफ -1) के साथ लेपित सब्सट्रेट पर विस्थापित करने के लिए अनुमति दी जाती है. हमारे आंकड़े बताते हैं कि टी lymphocytes ~ 15 सुक्ष्ममापी / मिनट की एक प्रवासी वेग प्रदर्शन. टी लिम्फोसाइट प्रवास integrin नाकाबंदी से हिचकते जा सकता है<sup> 1</sup> या सेलुलर actomyosin मशीनरी के inhibitors है कि सेल प्रवास को नियंत्रित<sup2></sup>.
Protocol
Discussion
इस प्रयोग में, हम प्राथमिक मानव टी lymphocytes की गतिशीलता का विश्लेषण करने के लिए एक सरल प्रणाली पर विवरण प्रदान करते हैं इन विट्रो प्रवास assays में विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं की हरकत में शामिल कई अणु और र…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस परियोजना के स्वास्थ्य अनुदान HL087088 (एम के) के राष्ट्रीय संस्थानों और HL18208 (एम के) द्वारा समर्थित किया गया था.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| RPMI 1640 | Gibco | 11875 | ||
| FBS | Thermo Scientific | SH300070.03 | ||
| Penicillin-Streptomycin | Gibco | 15140 | ||
| 1-Step Polymorphs | Accurate Chemical | AN221725 | ||
| PHA | Remel/Fisher Scientific | R30852801 | ||
| Rec. human IL-2 | R&D Systems | 202-IL | ||
| Rec. human IL-15 | R&D Systems | 247-IL | ||
| Protein G | Sigma Aldrich | 19459 | ||
| Rec. human ICAM-1/Fc | R&D Systems | 720-IC | ||
| Rec. human SDF-1 | R&D Systems | 350-NS |
References
- Hyun, Y. M., Chung, H. L., McGrath, J. L., Waugh, R. E., Kim, M. Activated integrin VLA-4 localizes to the lamellipodia and mediates t cell migration on VCAM-1. J Immunol. 183, 359-369 (2009).
- Morin, N. A., Oakes, P. W., Hyun, Y. M., Lee, D., Chin, Y. E., King, M. R., Springer, T. A., Shimaoka, M., Tang, J. X., Reichner, J. S., Kim, M. Nonmuscle myosin heavy chain IIA mediates integrin LFA-1 de-adhesion during T lymphocyte migration. The Journal of experimental medicine. 205, 195-205 (2008).
- Hyun, Y. M., Lefort, C. T., Kim, M. Leukocyte integrins and their ligand interactions. Immunologic research. , (2009).
