Denne artikkelen beskriver en metode for å montere levende sebrafiskembryoer for langsiktig avbildning. Denne metoden er kostnadseffektiv og enkel å utføre ved hjelp av vanlige mikroskopiretter med glassbunn for avbildning på invertert mikroskop. Monteringen utføres i lag av agarose ved forskjellige konsentrasjoner.
Protocol
1. Fremstilling av embryoer Etter parring, høst embryoer i E3 i en Petri-tallerken og inkuber dem ved 26,5 °C i ca. 28 timer før montering.MERK: Dette bremser utviklingen av embryoene slik at embryoene er omtrent på 30 somittstadium i begynnelsen av avbildningen. Bedøv embryoer i 0,016-0,020% trikain i E3. For å hemme pigmentering, legg PTU til en konsentrasjon på 200 μM. Dechorionate embryoene ved hjelp av tang under et dissekerende mikroskop. …
Representative Results
Figur 1 : Beskrivelse av monteringsmetode. (A) Tilsett sebrafiskembryoet i den lille brønnen som er laget av glassbunnen i 35 mm parabolen. (B) Tilsett agaroselag 1 i den lille brønnen for å dekke embryoet. (C) Legg forsiktig et dekselglass over den lille brønnen. (D) Tilsett agaroselag 2 på hele bunnen av 35 mm parabolen. (E) Tilsett E3 i retten. (F) Skjematisk tegning av et tverrsnitt av monteringsoppsettet. (G) Mi…
Materials
Low melting agarose
Sigma-Aldrich, MO
A9414
Store dissolved solution at 4 °C
35 mm glass bottom dishes with No. 0 coverslip and 10 mm diameter of glass bottom
Layered Agar Mounting: Preparing Live Zebrafish Embryos for Long-Term Imaging with an Inverted Microscope. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20186, doi: (2023).