Agarmontering: En grunnleggende metode for montering av levende sebrafiskembryoer for langtidsavbildning
Published: April 30, 2023
Abstract
Kilde: Hagedorn E. J., et al. Generering av parabiotiske sebrafiskembryoer ved kirurgisk fusjon av å utvikle Blastulae. J. Vis. Utt. (2016).
Denne videoen beskriver trinnvise instruksjoner om montering av levende sebrafiskembryoer på 6 brønnplater ved hjelp av lavsmelting agarose. Det gir også prosessen å skaffe bilder av levende embryoer og analysere det ved hjelp av programvare.
Protocol
1. Mikroskopoppsett, bildeanskaffelse, behandling og analyse Forbered 0,8% lavt smeltepunkt (LMP) agarose: Tilsett 0,8 g LMP agarose til 100 ml E3 og varm til den er fullstendig oppløst. Mens det var varmt, oppstod aliquot 1 ml LMP i 1,5 ml mikrofugerør i en 37 °C varmeblokk. LMP-agarose forblir smeltet ved 37 °C. Tilsett 40 μl 4 mg/ml (25x), pH 7,0 trikain til hver 1 ml aliquot av LMP agarose ved 37 °C. MERK: Hvis du arbeider med en pigmentert stamme, tilsett 20 μl 0,1…
Materials
| LMP agarose (Ultrapure LMP agarose) | Invitrogen | 16520100 |
| Tricaine (powder) (Tricaine Methanesulfonato, Tricaine-S) | Western Chemical Inc | MS 222 |
| Glass-bottom 6-well plates used for imaging | MatTek | P06G1.5-20-F |
| 10 ml pipette pump (green) (Pipette Pump Pipettor) | Novatech International | F37898-0000 |
Cite This Article
Agar Mounting: A Basic Method of Mounting Live Zebrafish Embryos for Long-Term Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20187, doi: (2023).