Montaje de agar: Un método básico de montaje de embriones de pez cebra vivo para imágenes a largo plazo

Abstract

Fuente: Hagedorn E. J., et al. Generación de embriones de pez cebra parabiótico por fusión quirúrgica de blastulas en desarrollo. J. Vis. (2016).

Este video describe instrucciones paso a paso sobre el montaje de embriones de pez cebra vivo en 6 placas de pozo utilizando agarose de fusión baja. También proporciona el proceso para adquirir imágenes de embriones vivos y analizarlo utilizando software.

Protocol

1. Configuración de microscopios, adquisición de imágenes, procesamiento y análisis Preparar 0.8% punto de fusión bajo (LMP) de agarose: Añadir 0.8 g LMP de agarose a 100 ml E3 y calentar hasta que se disuelva por completo. Mientras que caliente, aliquot 1 ml de LMP se agarose en tubos de microfugio de 1,5 ml en un bloque de calentamiento de 37 °C. La agarose LMP permanecerá fundida a 37 °C. Añadir 40 μl de 4 mg/ml (25x), pH 7.0 tricaine a cada 1 ml de agarose LMP a 37 °C. …

Materials

LMP agarose (Ultrapure LMP agarose)	Invitrogen	16520100
Tricaine (powder) (Tricaine Methanesulfonato, Tricaine-S)	Western Chemical Inc	MS 222
Glass-bottom 6-well plates used for imaging	MatTek	P06G1.5-20-F
10 ml pipette pump (green) (Pipette Pump Pipettor)	Novatech International	F37898-0000