Bromodeoxyuridine 펄스 라벨링 분석: 세포 증식을 측정하는 기법

초록

출처: Welschinger R. et al. 동기화 필요 없이 유세포 분석을 사용한 세포 주기 진행의 시간적 추적. J. Vis. 특급 (2015)

이 동영상은 세포 증식을 측정하기 위해 브로모데옥시우리딘(BrdU)을 사용한 포유류 세포의 단계적 펄스 라벨링 분석에 대해 설명합니다. BrdU 흡수를 통해 세포를 동기화할 필요 없이 특정 시점에 합성 단계에 있던 세포를 시간적으로 추적할 수 있습니다.

프로토콜

1. 솔루션 및 시약

1. 완전한 RPMI
   1. 56ml의 송아지 혈청(FCS)과 5.5ml의 200mM L-글루타민을 RPMI-1640 배지 500ml 병에 추가합니다.
2. BrdU 스톡 솔루션
   1. Dulbecco의 인산염 완충 식염수(DPBS)에서 32.5mM BrdU(10mg/ml)를 준비합니다.
3. BrdU 완전한 RPMI
   1. 6.2μl의 BrdU 원액을 Complete RPMI 10ml에 첨가합니다.
4. DNase 솔루션
   1. DPBS로 1mg DNase/ml를 준비합니다.
5. 염색 완충액
   1. DPBS에서 3% 열 불활성화 FCS와 0.09% 아지드화나트륨을 준비합니다.
6. Fixation Buffer, Permeabilization Buffer 및 Wash Buffer의 정의는 Materials List를 참조하십시오.

2. 셀

참고: 세포는 6개월 ....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
NALM6	디에스엠즈	ACC-128
5-브로모-2'-데옥시우리딘	시그마	B5002-1G
RPMI 1,640 w/o L-Gln 500 ml	론자	12-167층
디피에스	론자	17-512층
소 태아 세럼	피셔바이오텍	FBS-7100113
CO2 인큐베이터	바인더	재질 보기 C 150
BD Falcon 12 x 75mm FACS 튜브	BD 바이오사이언스	352008
BD LSR FORTESSA 유세포 분석기	BD 바이오사이언스	포르테사
원심 분리기	스핀트론	GT-175R