Summary

Induction transurétrale d'infection des voies urinaires souris

Published: August 05, 2010
doi:

Summary

Cette vidéo va montrer des méthodes pour induire des infections de souris transurethrally des voies urinaires et de quantifier l'ampleur des infections résultant.

Abstract

Souches uropathogènes bactériennes d'intérêt sont cultivés sur gélose. Généralement, uropathogènes<em> E. coli</em> (UPEC) et d'autres souches peuvent être cultivées pendant une nuit sur le milieu de Luria-Bertani (LB) d'agar à 37 ° C dans l'air ambiant. Souches UPEC grandir comme blanc-jaunâtre colonies translucides sur gélose LB. Après confirmation de la morphologie des colonies échéant, des colonies isolées sont ensuite repris pour être cultivées dans le bouillon. Bouillon LB peut être utilisé pour la plupart des souches bactériennes uropathogènes. Deux ports série, la nuit cultures de bouillon LB peut être employé pour amplifier l'expression de type I pili, un facteur de virulence bien définis pour les bactéries uropathogènes. Les cultures en bouillon sont diluées à la concentration voulue en tampon phosphate salin (PBS). Huit à 12 semaines vieilles souris femelles sont placées sous anesthésie à l'isoflurane et transurethrally inoculés avec des bactéries à l'aide de polyéthylène recouvert de tubes de 30 seringues de calibre. Inoculums typiques, qui doit être déterminé empiriquement pour chaque combinaison de souche / souris bactérienne, sont de 10<sup> 6</sup> À 10<sup> 8</sup> UFC par souris dans 10 à 50 microlitres de PBS. Après la période d'infection désiré (une journée à plusieurs semaines), les échantillons d'urine et de la vessie et les deux reins sont récoltés. Chaque organe est hachée, placé dans du PBS, et homogénéisé dans un homogénéisateur Bullet Bleu. Homogénats d'urine et les tissus sont dilués en série dans du PBS et cultivées sur gélose appropriée. Le jour suivant, les unités formant colonies sont comptées.

Protocol

I. Préparation de sonde urétrale Pour chaque vessie et du rein de souris à échantillonner, placez 5-6 billes en acier inoxydable (vessie, 1,6 mm ou de 0,9 à 2,0 la taille mélange mm) ou des billes d'oxyde de zirconium (rein, 0,5 mm taille) dans un tube cryovial, respectivement. Autoclaver les tubes de perles contenant. Après les tubes refroidir à température ambiante, ajouter 200 microlitres de PBS stérile à chaque acier billes contenant le tube inox et 400 microlitres de PBS stérile…

Discussion

L'induction d'infection des voies urinaires de la souris par inoculation transurétrale de bactéries est une procédure établie de longue date, mais techniquement exigeante 11. Hung et Hultgren récemment publié une excellente analyse des techniques d'infection des voies transurétrale de souris urinaires 13. Dans ce papier, nous tentons d'illustrer davantage les subtilités de cette approche expérimentale.

Les novices peuvent pratiquer leur techniqu…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Les auteurs tiennent à remercier Shelly Xie et Jennifer Payne pour leur assistance technique d'experts. Ce travail a été rendu possible grâce à des subventions de la Société d'urologie pédiatrique et le Fonds de recherche de Stanford en pédiatrie.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Cryovial tubes, 2.0 ml polypropylene (no caps)   E&K Scientific 640201  
Caps for cryovial tubes, with ‘O’ ring   E&K Scientific 440011-N  
Bullet Blender   Next Advance BBX24  
Zirconium Oxide Beads (0.5mm)   Next Advance ZROB05  
Stainless Steel Beads (1.6mm)   Next Advance SSB16  
Stainless Steel Bead Blend (0.9-2.0mm)   Next Advance SSB14B  
CBA/J Mice, 8-12 week old female   Jackson Laboratories 000656  
Phosphate Buffered Saline (NaCl 137mM, KCl 2.7mM, Na2HPO4 4.3mM, KH2PO4 1.4mM)   EMD EM-SX0420-13 (NaCl) EM-PX1405-1 (KCl) EM1.06585.0 (Na2HPO4) EM-5108-1 (KH2PO4)  
LB agar        
LB broth   EMD 1.10285.0500  
Isoflurane (Aerrane)   Baxter NDC 10019-773-60  
Inoculating loops   Fisher Scientific 22-363-601  
Eosin-methylene blue (EMB) agar powder   Himedia Laboratories MM022-500G  
MacConkey agar powder   Difco 212123  
LB agar powder   Difco 244520  
Intramedic non-radiopaque polyethylene tubing, PE10 [inner dimension 0.28 mm (0.011 inch); outer dimension 0.61 mm (0.024 inch)]   BD Biosciences 427401  
30 gauge needles, 1/2 inch   BD Biosciences 305106  
1 ml tuberculin Slip-Tip syringe   BD Biosciences 309602  
3 ml Luer-Lock syringe   BD Biosciences 309585  

References

  1. Schaeffer, A. J., Schwan, W. R., Hultgren, S. J., Duncan, J. L. Relationship of type 1 pilus expression in Escherichia coli to ascending urinary tract infections in mice. Infect Immun. 55, 373-380 (1987).
  2. Rouschop, K. M. Urothelial CD44 facilitates Escherichia coli infection of the murine urinary tract. J Immunol. 177, 7225-7232 (2006).
  3. Malaviya, R., Ikeda, T., Abraham, S. N. Contribution of mast cells to bacterial clearance and their proliferation during experimental cystitis induced by type 1 fimbriated E. coli. Immunol LettM. 91, 103-111 (2004).
  4. Lane, M. C., Alteri, C. J., Smith, S. N., Mobley, H. L. Expression of flagella is coincident with uropathogenic Escherichia coli ascension to the upper urinary tract. Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 16669-16674 (2007).
  5. Hvidberg, H. Development of a long-term ascending urinary tract infection mouse model for antibiotic treatment studies. Antimicrob Agents Chemother. 44, 156-163 (2000).
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  8. Gunther, N. W. t., Lockatell, V., Johnson, D. E., Mobley, H. L. In vivo dynamics of type 1 fimbria regulation in uropathogenic Escherichia coli during experimental urinary tract infection. Infect Immun. 69, 2838-2846 (2001).
  9. Bishop, B. L. Cyclic AMP-regulated exocytosis of Escherichia coli from infected bladder epithelial cells. Nat Med. 13, 625-630 (2007).
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  11. Hagberg, L. Ascending, unobstructed urinary tract infection in mice caused by pyelonephritogenic Escherichia coli of human origin. Infect Immun. 40, 273-283 (1983).
  12. Hopkins, W. J., Hall, J. A., Conway, B. P., Uehling, D. T. Induction of urinary tract infection by intraurethral inoculation with Escherichia coli: refining the murine model. J Infect Dis. 171, 462-465 (1995).
  13. Hung, C. S., Dodson, K. W., Hultgren, S. J. A murine model of urinary tract infection. Nat Protoc. 4, 1230-1243 (2009).

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Cite This Article
Thai, K. H., Thathireddy, A., Hsieh, M. H. Transurethral Induction of Mouse Urinary Tract Infection. J. Vis. Exp. (42), e2070, doi:10.3791/2070 (2010).

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