ट्रांसजेनिक का सृजन सी. एलिगेंस Biolistic परिवर्तन द्वारा
Summary
ट्रांसजेनिक कीड़े सामान्यतः में उपयोग किया जाता है<em> सी. एलिगेंस</em> अनुसंधान. वर्णित एक सरल, अभी तक प्रभावी, डीएनए लेपित सोने के कणों के साथ biolistic बमबारी का उपयोग कीड़े में transgenes परिचय प्रोटोकॉल है. शामिल प्रयास और बमबारी के परिणामों ट्रांसजेनिक जानवर की पीढ़ी के लिए microinjection के साथ तुलना कृपापूर्वक.
Abstract
मुक्त रहने निमेटोड सी का उपयोग प्रयोगशालाओं की संख्या एलिगेंस तेजी से बढ़ रहा है. इस जैविक मॉडल की लोकप्रियता एक तेजी पीढ़ी समय और कम जीवन अवधि, आसान और सस्ता रखरखाव, पूरी तरह से अनुक्रम जीनोम, और आरएनएआई संसाधनों और उत्परिवर्ती पशुओं की सरणी के लिए जिम्मेदार ठहराया है. इसके अलावा सी. के विश्लेषण, एलिगेंस जीनोम कीड़े और उच्च रीढ़ के बीच एक महान समानता है, जो पता चलता है कि कीड़े में अनुसंधान पूरी चूहों या संवर्धित कोशिकाओं में प्रदर्शन के अध्ययन के लिए एक महत्वपूर्ण सहायक हो सकता है पता चला. कीड़ा अनुसंधान के एक शक्तिशाली और महत्वपूर्ण हिस्सा ट्रांसजेनिक जानवर का उपयोग करने के लिए जीन स्थानीयकरण और समारोह का अध्ययन करने की क्षमता है. ट्रांसजेनिक जानवर कीड़ा germline के microinjection के माध्यम से या biolistic बमबारी के प्रयोग के माध्यम से बनाया जा सकता है. बमबारी एक नई तकनीक है और कम प्रयोगशालाओं के एक नंबर के लिए परिचित है. यहाँ हम एक सरल प्रोटोकॉल का वर्णन करने के लिए सोने के कणों के साथ जैव रेड पीडीएस 1000 प्रणाली का उपयोग biolistic बमबारी द्वारा ट्रांसजेनिक कीड़े उत्पन्न. द्विलिंग में डीएनए microinjection germline के साथ तुलना में, इस प्रोटोकॉल कीड़ा शरीर रचना की पहचान करने या microinjection प्रदर्शन करने का संबंध है के साथ ऑपरेटर से नहीं विशेष कौशल की आवश्यकता का लाभ है. इसके अलावा कई ट्रांसजेनिक लाइनों आमतौर पर एक एकल बमबारी से प्राप्त कर रहे हैं. इसके अलावा microinjection के विपरीत, biolistic बमबारी दोनों extrachromosomal सरणियों और एकीकृत transgenes के साथ ट्रांसजेनिक जानवर पैदा करता है. एकीकृत ट्रांसजेनिक लाइनों को प्राप्त करने की क्षमता mutagenic प्रोटोकॉल के उपयोग से बचने के लिए विदेशी डीएनए को एकीकृत कर सकते हैं. अंत में, biolistic बमबारी ट्रांसजेनिक जानवर की पीढ़ी के लिए एक आकर्षक तरीका विशेष रूप से समय और प्रयास microinjection में कुशल बनने के की जरूरत निवेश करने में दिलचस्पी नहीं जांचकर्ताओं के लिए किया जा सकता है.
Protocol
Discussion
Biolistic बमबारी सी. सहित कई जीवों में विदेशी डीएनए परिचय के लिए एक सरल तरीका है, 1,5,6,7,16 एलिगेंस. यह सोने 2 CaCl की उपस्थिति में डीएनए के साथ एक जटिल बनाने के कणों पर निर्भर करता है . Spermidine जैसे cationic polyamines, vivo म…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम पिट्सबर्ग और NIH अनुदान AG028977 के ALF विश्वविद्यालय से बीज फंडों द्वारा समर्थित किया गया था
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Gold particles | Inbio gold | BD021 | 1micron | |
| Midiprep kit | Qiagen | 12143 | ||
| Spermidine | Sigma | S4139 | ||
| Protamine | Sigma | P4505 | ||
| Macrocarriers | Biorad | 165-2335 | ||
| PDS-1000/He Hepta System | Biorad | 165-2257 | ||
| Rupture disk | Biorad | 165-2330 | ||
| Nystatin | Sigma | N1638 | ||
| Streptomycin | MP | 100556 |
References
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