활성 골수 - 유래 Macrophages과 Bradyzoite Toxoplasma gondii 약관의 낭종의 벽 형성
Summary
Toxoplasma gondii는 조직 문화 모델 했었 수있는 환경 스트레스에 대한 응답으로 낭종 형태로 변환됩니다. 이 동영상은 골수 파생 macrophages 뼈를 활성화하거나 fibroblast 세포 성장 매체 산도를 변경하여 낭종 벽 형성을 검토하기 위해 기술을 보여줍니다.
Abstract
Toxoplasma gondii는 온혈 동물의 nucleated 세포에 침입할 수있는 의무 세포내 기생충이다. 감염 동안, T. 빠른 복제 양식이 tachyzoite 전화로 gondii는 disseminates. Tachyzoites 잘 묘사되지 않은 신호 처리에 의해 bradyzoite라는 느린 성장 encysted 형식으로 변환합니다. 동물 내에서 bradyzoite의 cysts는 중추 신경계와 근육 조직에서 발견하고 감염의 만성 단계를 대표하고 있습니다. bradyzoites 전환은 높은 산도, 또는 인터페론 감마 (IFNγ)의 추가로 매체를 사용하여 CO 2 기아의 조직 문화에 시뮬레이션 할 수 있습니다. Bradyzoites는 렉틴가 Dolichos biflorus agglutinin (DBA)가 바인딩에 낭종 벽의 존재에 의해 특징입니다. 찬란 분류 DBA는 낮은 CO 2와 높은 산도 매체에 노출되었습니다 인간의 포피의 섬유아 세포 (HFFs) 재배 기생충에있는 낭종 벽을 시각화하는 데 사용됩니다. 마찬가지로, 기생충은 BMMs가 IFNγ와 lipopolysaccharide (LPS)로 활성화한 후 골수 파생 macrophages (BMMs)가 DBA에 의해 감지 낭종 벽을 표시 murine 뼈에 거주. 이 프로토콜은 T.의 전환을 유도하는 방법을 보여줍니다 것입니다 BMMs의 낮은 CO 2 및 활성화와 높은 산도 성장 매체를 사용하여 bradyzoites하는 gondii. 호스트 세포는 coverslips에 대한 교양 tachyzoites와 감염 중 IFNγ와 LPS (BMMs)를 추가로 활성이나 사흘 동안 높은 산도 성장 매체 (HFFs)에 노출됩니다. 감염 완료되면, 호스트 세포는 고정 permeabilized 및 차단됩니다. 낭종 벽은 형광 현미경과 rhodamine의 DBA를 사용하여 시각 것입니다.
Protocol
Discussion
T.의 bradyzoite 개발의 메커니즘은 완전히 이해되지 않지만, 분자 유전 분석 조직 문화 gondii 단계 변환 bradyzoite의 낭종 형성 2,3,4에 관련된 유전자의 발견되었다. 분석은 또한 일부 bradyzoite 마커가 활성화 macrophages 5,6 성장 등 다른 장기 응력 조건에서 표현되는 관찰되었다. 위의 방법은 T. 성장하는 방법을 설명합니다 gondii와 유도 발전 BMCs과 HFFs 모두에서 DB…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Bovine serum albumin | Sigma | A7906 | ||
| Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM) | Gibco | 11960-051 | ||
| Fetal Bovine Serum (FBS) | Atlanta Biologicals | S11150 | heat inactivate | |
| Rhodamine Dolichos biflorus agglutinin | Vector Laboratories | RL-1032 | ||
| Formaldehyde (16%) | Polysciences | 18814 | ||
| Glycine | Fisher Scientific | BP381-5 | ||
| HEPES | Fisher Scientific | BP310-1 | ||
| IFNγ | PeproTech | 315-05 | Store in single use aliquots | |
| L-glutamine (200mM) | Gibco | 25030 | ||
| Lipopolysaccharide (LPS) | Sigma | L4391-1MG | Store in single use aliquots | |
| Microscope Cover Glass | Fisher Scientific | 12-545-80 12CIR-1 | ||
| Penicillin-Streptomycin | Gibco | 15140 | ||
| RPMI medium 1640 powder (with L-glutamine, without bicarbonate) | Gibco | 31800-022 | ||
| Triton-X-100 | Fisher Scientific | BP151-500 | ||
| Trypsin-EDTA (0.25%) | Gibco | 25200 | ||
| VectaShield mounting media with DAPI | Vector Laboratories | H-1200 |
References
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