在体内微循环在骨骼肌内重要的显微镜测量

Summary

提出一种新的微循环观察通用的方法。它被认为是适合长期观察，并结合pharmacophysiological或分子生物学干预。

Abstract

背景：监管因素和体内微循环的详细生理仍然没有完全澄清后成像发明了许多不同的方式。虽然许多宏观参数的血流量反映流速，血流速度和血红细胞（RBC）的变化通量不持有在显微镜观察的线性关系。有报告的差异之间的红细胞流速和红细胞通量，红细胞磁通和血浆流量，并在显微镜下观察，一个更详细的研究在微循环调节的要求的科学依据，使用的外围组织的时空异质性的流量调节活体显微镜。

方法：我们在显微镜下观察体内鼠标胸锁乳突肌肌肉修改杰夫李奇曼的方法。小鼠麻醉后，通风，并注射PKH26L -荧光标记的红细胞显微镜观察。

结果与结论：荧光标记的红细胞是由宽视场显微镜检测和区分。电刺激诱导的红细胞通量增加肌肉的收缩诱发。包括红细胞流速和毛细血管密度其它参数的量化是可行的。小鼠的耐受性以及手术，注射染色红细胞，显微镜下观察，和电刺激。没有肌肉或血管损伤，这表明我们的方法是侵入性和长期观察，比较适合。

Protocol

RBC膜染色与肝素相同的小鼠品系小鼠红细胞纠正。 小鼠红细胞染色PKH26染料（五百六十七分之五百五十一nm的红色荧光细胞连接器套件，美国Sigma公司）。 在PBS洗涤红细胞和2μm的溶液在室温下5分钟的PKH26染料孵育。反应是停止通过增加血浆（热灭活1小时在65℃事前）和孵育1分钟。 染色用PBS洗涤红细胞的5倍。 鼠标的制备在这项研究中分?…

Discussion

重要技术资料的要点如下：（1）观察维护动物的生理状况（通风，pH值perfusative解决方案，体温），（2）染色红细胞的注射量，（3）条件（最佳镜头选择，荧光强度）。未来潜在的应用如下：（一）结合pharmacophysiological和/或分子生物学干预措施，（二）长期观察动脉硬化/ arteriolo硬化和新生血管。

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
PKH26 dye		Sigma		551/567 nm; Red fluorescent cell linker kit
C57BL/10 mice	Animal			Three to six month old males
pentobarbital				anesthetic, 50mg/kgBW, i.p.