내부 핵심 현미경에 의해 골격근의 생체내 미세 순환 측정
Summary
엑기스의 관찰을위한 새로운 다양한 방법을 제시합니다. 이것은 장기 관찰에 적합 간주하고, pharmacophysiological 또는 분자 생물 학적 중재와 함께입니다.
Abstract
배경 : 규제 요인 및 생체내의 엑기스에 대한 자세한 생리가 남아있어 완전히 이미지가 발명했다 다양한 modalities 후 명확히하지 않습니다. 혈액 흐름의 많은 매크로 매개 변수는 유속, 혈액 흐름 속도와 적혈구 세포 (RBC)의 변화를 반영하는 동안 흐름은 현미경 관찰에 선형 관계를 보유하지 않습니다. RBC 속도와 RBC 플럭스, RBC 자속 및 플라즈마 흐름 볼륨 사이에, 그리고 현미경 관찰, 사용 microcirculatory 규정에 자세한 연구의 요구에 대해 과학적 근거에 주변 조직의 흐름을 규제의 공간 및 시간적 이질의 차이가보고있다 intravital 현미경.
방법 : 우리는 마우스 sternomastoid 근육의 생체내 미세 관찰의 제프 Lichtman의 방법을 수정했습니다. 마우스가 anesthetized 있으며, 환기, 그리고 현미경 관찰을위한 PKH26L – 찬란 분류 RBCs 주사.
결과 및 결론 : 찬란 분류 RBCs가 감지하고 넓은 분야 현미경으로 잘 구분할 수 있습니다. 근육 수축은 RBC 유동적 전기 자극을 유발 증가 evoked. RBC의 속도와 모세관 밀도 등 다른 매개 변수의 부량이 가능했다. 마우스는 잘 수술, 스테인드 RBCs의 주입, 현미경 관찰, 전기 자극을 용납. 아무도 근육이나 혈관 손상은 우리의 방법은 상대적으로 덜 침습 장기 관찰에 적합 것을 제안, 관찰되지 않았습니다.
Protocol
Discussion
중요 techinical 포인트는 다음과 같다 : (1) 관찰을위한 생리 동물의 상태 (perfusative 솔루션, 체온의 환기, 산도), 스테인드 RBC (2) 사출 볼륨, 그리고 (3) 조건의 유지 보수 (최적 렌즈 선택, 형광 강도). 향후 응용 프로그램은 다음과 같습니다 pharmacophysiological 및 / 또는 분자 생물 학적 개입과 (A) 조합, arterio / arteriolo – 경화증과 neovascularization의 (B) 장기 관찰.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 근육의 생체내 관찰에 그의 조언 JW Lichtman 감사합니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| PKH26 dye | Sigma | 551/567 nm; Red fluorescent cell linker kit | ||
| C57BL/10 mice | Animal | Three to six month old males | ||
| pentobarbital | anesthetic, 50mg/kgBW, i.p. |
References
- Lichtman, J. W., Magrassi, L., Purves, D. Visualization of neuromuscular junctions over periods of several months in living mice. J Neurosci. 7, 1215-1222 (1987).
