utero의 electroporation에서 생체내에의 연결 전구 세포를 transfecting위한 가치있는 방법입니다. 전극과 electroporation의 발달 timepoint의 위치에 따라, 피질 세포의 특정 하위 집합을 타겟팅할 수 있습니다. 타겟 세포는 다음 생체내 또는 유전 변경의 효과에 대한 체외에서 분석할 수 있습니다.
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방법 논문
utero에서 Electroporation은 두피 뉴런의 하위 집합의 유전자 기능을 학습에 대한 기본의 연결을 문화 뒤에
이 논문에서
요약
초록
기본의 연결을 문화의 체외 연구에서 neurite 가지의 양적 분석을 허용합니다. 유전자 변경은 프로세스의 연결 가지, shRNA 또는 cDNA 구조는 화학 transfection 또는 바이러스성 전달을 통해 기본 뉴런에 도입 수있는 영향을 미치는지 연구하기 위해. 그러나, 기본 대뇌 피질의 세포와 세포 유형 (다른 레이어, 억제 신경, glial 세포에서 glutamatergic 뉴런)의 이질적인 수영장은 이러한 방법을 사용 transfected 있습니다. 배아 쥐 대뇌 피질의 DNA 구조를 소개 utero의 electroporation에의 사용 대상으로 세포의 특정 하위 집합을 허용 : 피질의 초기 배아 피질 대상 깊은 레이어 electroporation은 늦은 배아 timepoints에 electroporation은 더 많은 외면적인 레이어를 대상으로하면서. 또한, 피질의 지느러미 - 중간 대 복부 - 가로 영역의 대상에서 개별 배아 결과의 머리를 통해 전극의 차등 배치. electroporation 다음, transfected 세포는 밖으로 해부 dissociated와 neurite 가지의 정량 분석을 위해 체외에서 도금 수 있습니다. 여기, 우리는 양적 대뇌 피질 세포의 하위 집합에의 연결 프로세스 가지를 측정하기위한 단계별 방법을 제공합니다.
utero의 electroporation에 대한 기본적인 프로토콜은 Kriegstein 연구실 1, 2에서 두 개의 다른 조브 기사에 자세히 설명되어있다. 우리의 연결 프로세스 가지의 유전자 기능 연구에 utero의 electroporation에 적용의 프로토콜에 대한 설명 다음에 가장 중요한 세부 사항에 초점을 utero의 electroporation에 우리의 프로토콜의 개요를, 제공할 것입니다.
프로토콜
utero의 electroporation에 대한 기본적인 프로토콜은 Kriegstein 연구실 1, 2에서 다른 조브 문서에서 자세히 설명되었습니다. 이 기법은 원래 오스미 연구실 3 설명한 및 프로토콜 LoTurco 실험실 4 개발 하나를 발견을 기반으로합니다. 우리의 연결 프로세스 가지의 유전자 기능 연구에 utero의 electroporation에 적용되는 우리의 프로토콜에 대한 설명 다음에 가장 중요한 세부 사항에 초점을 쥐 배아의 utero의 electroporation에 대한 우리의 프로토콜의 개요를, 제공할 것입니다.
1. utero의 Electroporation에
- DNA와 로딩 바늘을 준비
utero의 electroporations에 대한 첫 번째 단계는 DNA가 당신이 주입하려는 구조 결정 실험을 디자인하는 것입니다. 이 방법은 misexpressing 또는 관심 유전자를 쓰러뜨린 모두 유용합니다. 이 misexpressing 또는 overexpressing 유전자에 계획하는 경우의 연결을 전구체 세포 활성 프로 모터를 사용해야....
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토론
기본의 연결을 문화의 체외 연구에서 neurite 가지의 양적 분석을 위해 수 있습니다. 유전자 변경은 프로세스의 연결을 가지 영향을 미치는지 연구하기 위해, shRNA 또는 misexpression 구조는 화학 transfection 또는 바이러스성 전달을 통해 기본 뉴런에 소개하실 수 있습니다. 그러나, 기본 대뇌 피질의 세포와 세포 유형 (다른 레이어, 억제 신경, glial 세포에서 glutamatergic 뉴런)의 이질적인 수영장은 이러한 방법을 사용 transfected 있습니다. 배아 쥐 대뇌 피질의 DNA 구조를 소개 utero의 electroporation에의 사용 대상으로 세포의 특정 하위 집합을 허용 : 피질의 초기 배아 피질 대상 깊은 레이어 electroporation은 늦은 배아 timepoints에 electroporation은 더 많은 외면적인 레이어를 대상으로하면서. 또한, 피질의 지느러미 - 중간 대 복부 - 가로 영역의 대상에서 개별 배아 결과의 머리를 통해 전.......
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공개 사항
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
감사의 글
저자는이 기술에 대한 유용한 토론 요셉 LoTurco과 데니스 Selkoe 감사하고 싶습니다. 저자는이 연구의 지원, 미국의 건강 보조 재단의 기부자 감사합니다.
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재료
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| 100 x 15 mm 페트리 접시 | Fisher Scientific | 08-757-12 | |
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| 50 mL 원추형 튜브 | Sarstedt Ltd | 62-554-205 | |
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참고문헌
- Walantus, W., Castaneda, D., Elias, L., Kriegstein, A. In utero intraventricular injection and electroporation of E15 mouse embryos. J Vis Exp. , (2007).
- Walantus, W., Elias, L., Kriegstein, A. In utero intraventricular injection and electroporation of E16 rat embryos. J Vis Exp
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