Étudier l'influence gliales hétérogénéité cellulaire sur la croissance axonale aide d'une méthode coculture Nouveau
Summary
Dans ce protocole, nous avons décrit une nouvelle méthode pour étudier l'influence de l'hétérogénéité des cellules gliales sur la croissance des axones avec un<em> In vitro</em> Système de co-culture. Corticaux de rat les cellules gliales ont été cultivées jusqu'à confluence et co-cultivées avec hautement purifiées du rat dorsale neurones ganglions de la racine. Différents une influence sur l'adhérence des cellules gliales et neurones croissance axonale a été comparé directement à la même culture. Cette méthode offre une nouvelle façon d'étudier directement l'influence des cellules gliales hétérogénéité sur l'adhérence et la croissance des neurones axone.
Abstract
Dans le système nerveux central de tous les mammifères, les axones sectionnés après une blessure sont incapables de se régénérer à leurs objectifs initiaux et la récupération fonctionnelle est très pauvre 1. L'échec de la régénération des axones est le résultat combiné de plusieurs facteurs, notamment l'environnement des cellules gliales hostile, inhibition des molécules liées et une diminution de la myéline des neurones intrinsèques de régénération capacité 2. Les astrocytes sont les cellules les plus prédominantes gliales dans le système nerveux central et de jouer un rôle important dans les fonctions axone sous la physiologie et la pathologie des conditions 3. Contraste pour les oligodendrocytes homologues, les astrocytes sont une population cellulaire hétérogène composé par différentes sous-populations d'astrocytes avec des morphologies différentes et 4 l'expression des gènes. La signification fonctionnelle de cette hétérogénéité, comme leurs influences sur la croissance des axones, est largement inconnue.
Pour étudier les cellules gliales, en particulier la fonction de l'hétérogénéité des astrocytes dans le comportement des neurones, nous avons établi une nouvelle méthode de co-culture de haute purifiée dorsale neurones ganglions de la racine avec des cellules gliales obtenu à partir du cortex de rat. Par cette technique, nous avons pu comparer directement l'adhérence et la croissance des axones des neurones sur les sous-populations différentes astrocytes dans les mêmes conditions.
Dans ce rapport, nous donnons le protocole détaillé de cette méthode pour l'isolement et la culture des astrocytes, neurones ganglions de la racine dorsale isolement et de purification, et la co-culture de neurones avec GHM astrocytes. Cette méthode pourrait également être étendu aux autres régions du cerveau à l'étude cellulaire ou régionales interaction spécifique entre neurones et cellules gliales.
Protocol
Discussion
Ce protocole expérimental a été conçu pour atteindre deux objectifs d'étudier les cellules gliales, l'influence en particulier l'hétérogénéité des astrocytes sur l'adhésion des neurones et la croissance des neurites. Le premier objectif était de maintenir l'hétérogénéité des astrocytes autant que possible, dans cette expérience, la confluence des cellules gliales de la culture des astrocytes a été mélangé enrichi la culture primaire sans aucun traitement chimique et de la propag…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Cette étude a été soutenue par FMMU nouvelle fondation et trouver le financement partiel du NIH.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM(high glucose) | Invitrogen | 10313-039 | ||
| L15 medium | Invitrogen | 11415-114 | ||
| FBS | Invitrogen | 10437-077 | ||
| Neurobasal Medium | Invitrogen | 21103-049 | ||
| poly-lysine | Sigma | P4832 | culture grade | |
| NGF(2.5S) | Invitrogen | 13257-019 | ||
| B27 supplyment | Invitrogen | 17504-044 | ||
| 0.25% trypsin-EDTA | Invitrogen | 25200-056 | ||
| FUDR | Sigma | F0503 | ||
| neurofilament antibody | Abcam | ab24575 |
References
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