새 Coculture 방법을 사용 액슨 성장에 대한 연구 Glial 세포 이질 영향
Summary
이 프로토콜에서는, 우리는 함께 축삭의 성장에 glial 세포 이질의 영향을 연구하는 새로운 방법을 설명<em> 체외에서</em> 공동 문화 시스템. 쥐 대뇌 피질의 glial 세포가 합류하는 교양과 고도의 쥐 등의 루트 신경의 신경을 정화와 cocultured되었습니다. 뉴런의 부착 및 축삭의 성장에 다른 glial 세포에 영향을 같은 문화에 직접적으로 비교했다. 이 방법은 직접적으로 신경 세포의 부착 및 축삭의 성장에 glial 세포 이질의 영향을 연구하는 새로운 방법을 제공합니다.
Abstract
모든 포유 동물의 중추 신경계에 부상 후 절단 axons 1 매우 가난 원래의 목표와 기능 회복에 재생 수 없습니다. 축삭 재생의 실패는 적대적 glial 세포 환경 억제 myelin 관련 분자 및 내장 신경 세포 재생 능력이 감소 등 여러 가지 요인의 복합 결과입니다. Astrocytes는 중추 신경계에서 가장 지배 glial 세포 유형이며, 생리학 및 병리 조건 3 아래의 축삭 기능에 중요한 역할을한다. 동종 oligodendrocytes에 대비, astrocytes는 다양한 morphologies 및 유전자 발현 4 가지 astrocyte subpopulations로 구성된 이종 세포 인구입니다. 같은 축삭의 성장에 대한 자신의 영향으로이 이질의 기능적 의미는, 대부분 알 수 있습니다.
특히 glial 세포, 신경 세포의 동작 astrocyte 이질의 기능을 연구하기 위해, 우리는 쥐의 피질에서 얻은 glial 세포와 공동 culturing 높은 정화 등의 루트 신경의 신경에 의해 새로운 방법을 만들었습니다. 이 기법으로, 우리는 직접적으로 동일한 조건하에 다른 astrocytes의 subpopulations에서 신경 세포의 부착 및 축삭의 성장을 비교할 수 있었다.
이 보고서에서 우리는 astrocytes 절연 및 문화 등의 루트 신경 뉴런의 절연 및 정화하고, astrocytes와 뉴런을 DRG의 공동 문화에 대해이 방법의 상세한 프로토콜을 제공합니다. 이 방법은 뉴런과 glial 세포 사이의 세포 또는 지역 특정 상호 작용을 연구하는 다른 뇌 영역 확장 수 있습니다.
Protocol
Discussion
이 실험 프로토콜은 glial 세포, 신경 세포의 부착 및 neurite 성장에 특히 astrocyte 이질의 영향을 연구하는 두 목표를 달성하도록 설계되었습니다. 첫 번째 목표는이 실험에서 astrocyte 이질 최대한을 유지하는 것이었다, 합류 glial 세포 배양 농축 astrocytes는 더욱 세포를 손상 astrocytes의 부상 반응을 유발 수있는 화학 치료 및 소화 전파없이 기본 문화를 혼합했다. 최종 astrocyte 순도가 fibrobasts FN 의해 검?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 연구는 FMMU 새로운 재단과 부분적으로 NIH의 기금을 찾는 의해 지원되었다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM(high glucose) | Invitrogen | 10313-039 | ||
| L15 medium | Invitrogen | 11415-114 | ||
| FBS | Invitrogen | 10437-077 | ||
| Neurobasal Medium | Invitrogen | 21103-049 | ||
| poly-lysine | Sigma | P4832 | culture grade | |
| NGF(2.5S) | Invitrogen | 13257-019 | ||
| B27 supplyment | Invitrogen | 17504-044 | ||
| 0.25% trypsin-EDTA | Invitrogen | 25200-056 | ||
| FUDR | Sigma | F0503 | ||
| neurofilament antibody | Abcam | ab24575 |
References
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