Estudo Influência Heterogeneidade células gliais no crescimento Axon Usando um método de co-cultura New
Summary
Neste protocolo, descrevemos um novo método para estudar a influência da heterogeneidade das células gliais no crescimento do axônio com uma<em> In vitro</em> Sistema de co-cultura. Rat cortical células gliais foram cultivadas a confluência e cocultured altamente purificado com ratos neurônios do gânglio dorsal da raiz. Influência das células gliais em diferentes neurônios adesão e crescimento do axônio foi comparado diretamente na mesma cultura. Este método oferece uma nova forma de estudar diretamente a influência heterogeneidade glial células em neurônios de adesão e crescimento do axônio.
Abstract
No sistema nervoso central de todos os mamíferos, os axônios cortados após a lesão não são capazes de regenerar as suas metas originais e recuperação funcional é muito pobre 1. O fracasso do axônio regeneração é um resultado combinado de vários fatores, incluindo o ambiente hostil de células gliais, as moléculas inibidoras de mielina relacionadas e diminuição da capacidade de regeneração intrínseca neurônio 2. Astrócitos são o tipo de célula glial predominante no sistema nervoso central e desempenham papel importante nas funções do axônio em fisiologia e patologia condições 3. Contraste com os oligodendrócitos homólogos, os astrócitos são uma população heterogênea de células compostas por diferentes subpopulações de astrócitos com morfologias diferentes e expressão do gene 4. O significado funcional dessa heterogeneidade, tais como suas influências sobre o crescimento do axônio, é largamente desconhecida.
Para o estudo da célula glial, especialmente a função da heterogeneidade de astrócitos no comportamento dos neurônios, foi estabelecido um novo método de co-cultura purificada de alta neurônios gânglios da raiz dorsal com células gliais obtidos a partir do córtex de ratos. Por esta técnica, nós fomos capazes de comparar diretamente adesão neurônio e crescimento do axônio em diferentes subpopulações astrócitos sob a mesma condição.
Neste relatório, nós damos o protocolo detalhada deste método para astrócitos isolamento e cultura, gânglios da raiz dorsal de isolamento e purificação neurônios, e os co-cultura de neurônios DRG com astrócitos. Este método também pode ser estendido para outras regiões do cérebro para estudar celular ou regionais específicos de interacção entre os neurônios e células gliais.
Protocol
Discussion
Este protocolo experimento foi projetado para atingir dois objetivos de estudar as células da glia, astrócitos influência heterogeneidade especialmente sobre neurônio adesão e crescimento neurite. O primeiro objetivo era manter a heterogeneidade astrócitos, tanto quanto possível, neste experimento, a célula glial confluentes astrócitos cultura enriquecida foi misturado cultura primária, sem qualquer tratamento químico e propagação de digestão, o que pode prejudicar ainda mais a célula e induzir a resposta…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este estudo foi apoiado por FMMU nova descoberta fundação e financiando parte do NIH.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM(high glucose) | Invitrogen | 10313-039 | ||
| L15 medium | Invitrogen | 11415-114 | ||
| FBS | Invitrogen | 10437-077 | ||
| Neurobasal Medium | Invitrogen | 21103-049 | ||
| poly-lysine | Sigma | P4832 | culture grade | |
| NGF(2.5S) | Invitrogen | 13257-019 | ||
| B27 supplyment | Invitrogen | 17504-044 | ||
| 0.25% trypsin-EDTA | Invitrogen | 25200-056 | ||
| FUDR | Sigma | F0503 | ||
| neurofilament antibody | Abcam | ab24575 |
References
- Rossignol, S., Schwab, M., Schwartz, M., Fehlings, M. G. Spinal cord injury: time to move?. J Neurosci. 27 (44), 11782-11792 (2007).
- Yiu, G., He, Z. Glial inhibition of CNS axon regeneration. Nat Rev Neurosci. 7 (8), 617-627 (2006).
- Barres, B. A. The mystery and magic of glia: a perspective on their roles in health and disease. Neuron. 60 (3), 430-440 (2008).
- Matyash, V., Kettenmann, H. Heterogeneity in astrocyte morphology and physiology. Brain Res Rev. , (2009).
- Wanner, I. B., Deik, A., Torres, M., Rosendahl, A., Neary, J. T., Lemmon, V. P., Bixby, J. L. A new in vitro model of the glial scar inhibits axon growth. Glia. 56 (15), 1691-1709 (2008).
- Kuffler, D. P., Sosa, I. J., Reyes, O. Schwann cell chondroitin sulfate proteoglycan inhibits dorsal root ganglion neuron neurite outgrowth and substrate specificity via a soma and not a growth cone mechanism. J Neurosci Res. 87 (13), 2863-2871 (2009).
- Kleitman, N., Wood, P. M., Bunge, R. P. Tissue culture method for the study of myelination. Culturing nerve cells. , P559-P559 (1998).
