Summary

Estudio de células gliales Influencia heterogeneidad de crecimiento de los axones se utiliza un método co-cultivo de Nueva

Published: September 06, 2010
doi:

Summary

En este protocolo, que describe un nuevo método para estudiar la influencia de la heterogeneidad de las células gliales en el crecimiento del axón con una<em> In vitro</em> Co-cultura del sistema. Rata células gliales corticales se cultivaron hasta la confluencia con cocultured y altamente purificado rata dorsal neuronas de los ganglios de la raíz. Influencia de diferentes células de la glía en la adhesión de las neuronas y crecimiento de los axones se comparó directamente en la misma cultura. Este método proporciona una nueva forma de estudiar directamente la influencia de células gliales heterogeneidad en la adhesión neuronal y el crecimiento del axón.

Abstract

En el sistema nervioso central de los mamíferos, axones dañados después de una lesión no son capaces de regenerar a sus objetivos originales y la recuperación funcional es muy pobre 1. El fracaso de la regeneración axonal es el resultado combinado de varios factores, incluyendo el ambiente hostil de células gliales, las moléculas inhibidoras de mielina y disminución de la relación intrínseca capacidad de regeneración de las neuronas 2. Los astrocitos son el tipo de células gliales más predominante en el sistema nervioso central y desempeñan un papel importante en las funciones del axón en la fisiología y la patología de condiciones 3. A diferencia de los oligodendrocitos homólogos, los astrocitos son una población celular heterogénea compuesta por diferentes sub-poblaciones de astrocitos con diversas morfologías y la expresión génica 4. La importancia funcional de esta heterogeneidad, como su influencia en el crecimiento axonal, es prácticamente desconocida.

Para el estudio de las células gliales, especialmente la función de la heterogeneidad de los astrocitos en el comportamiento de las neuronas, que estableció un nuevo método de cultivo de alta co-purificado neuronas raíz dorsal ganglios con células gliales obtenido de la corteza cerebral de rata. Mediante esta técnica, hemos sido capaces de comparar directamente la adhesión neuronal y el crecimiento de los axones en las subpoblaciones astrocitos diferentes en las mismas condiciones.

En este informe, le damos el protocolo detallado de este método para el aislamiento de los astrocitos y la cultura, los ganglios de la raíz dorsal neuronas aislamiento y purificación, y el co-cultivo de neuronas DRG con los astrocitos. Este método también podría extenderse a otras regiones del cerebro para estudiar la interacción celular específica o regionales entre las neuronas y células gliales.

Protocol

1. Cultivo de células glía Las células gliales pueden ser cultivadas de diferentes regiones del sistema nervioso central. Todo el proceso se muestra en la figura del proceso. Día 1 de recubrimiento placa de cultivo y cubreobjetos Seco ronda esterilizados cubreobjetos de vidrio para microscopio en un autoclave. La placa cubreobjetos esterilizad…

Discussion

Este protocolo experimento fue diseñado para alcanzar dos metas para estudiar las células gliales, la influencia de la heterogeneidad, especialmente los astrocitos en la adhesión neuronal y el crecimiento de las neuritas. El primer objetivo era mantener la heterogeneidad de los astrocitos en lo posible, en este experimento, la confluencia de las células gliales cultura astrocitos enriquecido se mezcla la cultura primaria sin ningún tipo de tratamiento químico y la propagación de la digestión, lo cual puede daña…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Este estudio fue apoyado por FMMU nueva búsqueda de fundación y en parte la financiación del NIH.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
DMEM(high glucose)   Invitrogen 10313-039  
L15 medium   Invitrogen 11415-114  
FBS   Invitrogen 10437-077  
Neurobasal Medium   Invitrogen 21103-049  
poly-lysine   Sigma P4832 culture grade
NGF(2.5S)   Invitrogen 13257-019  
B27 supplyment   Invitrogen 17504-044  
0.25% trypsin-EDTA   Invitrogen 25200-056  
FUDR   Sigma F0503  
neurofilament antibody   Abcam ab24575  

References

  1. Rossignol, S., Schwab, M., Schwartz, M., Fehlings, M. G. Spinal cord injury: time to move?. J Neurosci. 27 (44), 11782-11792 (2007).
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Cite This Article
Xu, H., Gou, L., Dong, H. Study Glial Cell Heterogeneity Influence on Axon Growth Using a New Coculture Method. J. Vis. Exp. (43), e2111, doi:10.3791/2111 (2010).

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