Summary

Axon Büyüme, Yeni Bir Coculture Yöntemle Çalışması Glial Hücre heterojenite Etkisi

Published: September 06, 2010
doi:

Summary

Bu protokol, glial hücre heterojenite bir akson büyüme üzerindeki etkisini incelemek için yeni bir yöntem tarif<em> In vitro</em> Ko-kültür sistemi. Rat kortikal glial hücreleri birleştiği kültürlü ve yüksek sıçan dorsal kök gangliyon nöronları saflaştırılmış ile kültüre edildi. Farklı glial hücre nöronlar yapışma ve akson büyüme etkisi aynı kültürü doğrudan karşılaştırıldı. Bu yöntem, doğrudan nöron yapışma ve akson büyüme glial hücre heterojenite etkisini incelemek için yeni bir yol sağlar.

Abstract

Tüm memelilerin merkezi sinir sisteminde, yaralanma sonrası kopmuş aksonları 1 çok kötü orijinal hedefleri ve fonksiyonel iyileşme, rejenerasyon mümkün değildir. Akson rejenerasyonu yetmezliği kombine düşmanca glial hücre çevre, miyelin ilgili inhibitör molekülleri ve içsel nöron rejeneratif kapasitesi 2 azalma da dahil olmak üzere çeşitli faktörlerin bir sonucudur. Astrositler merkezi sinir sisteminde en baskın glial hücre tipi ve fizyoloji ve patoloji koşulları 3 altında akson fonksiyonlarında önemli rol oynar. Kontrast, homolog oligodendrosit astrositler farklı morfolojileri ve gen ekspresyonu 4 farklı astrosit alt popülasyonlar oluşan heterojen bir hücre popülasyonu vardır. Akson büyüme üzerindeki etkiler bu heterojenite fonksiyonel önemi, büyük ölçüde bilinmemektedir.

Özellikle glial hücre, nöron davranış astrosit heterojenite fonksiyonunu incelemek için, biz, ortak kültür, sıçan korteks elde glial hücreleri ile yüksek saflaştırılmış dorsal kök gangliyon nöronları yeni bir yöntem oluşturdu. Bu teknikle, aynı koşul altında farklı astrositler alt popülasyonlar nöron yapışma ve akson büyüme karşılaştırabileceksiniz.

Bu raporda, astrositler izolasyonu ve kültürü, dorsal kök ganglionlar nöronlar izolasyon ve saflaştırma ve astrositler ile nöronların DRG ko-kültür için bu yöntemi ayrıntılı protokol verir. Bu yöntem ayrıca, nöronlar ve glial hücreler arasındaki hücresel veya bölgesel belirli bir etkileşim çalışması için diğer beyin bölgelerine uzatılabilir.

Protocol

1. Glia Hücre Kültür Glial hücreleri, merkezi sinir sisteminin farklı bölgelerinde yetiştirilebilir. Tüm süreç süreç resimde gösterilmiştir. Gün 1 Kaplama kültür plaka ve lamelleri Kuru steril cam mikroskop yuvarlak bir otoklavda lamelleri. Sterilize 24-kuyu kültür plaka içine Plaka sterilize lamelleri. Kat poli-lisin ve …

Discussion

Bu deney protokolü, glial hücreler, nöron yapışma ve neurite büyüme özellikle astrosit heterojenite etkisi çalışma iki hedeflere ulaşmak için tasarlanmıştır. Ilk golü bu deneyde astrosit heterojenite, mümkün olduğu kadar korumak için, konfluent glial hücre kültürü zenginleştirilmiş astrositler daha fazla hücre hasarı ve astrositler yaralanması tepki neden olabilecek herhangi bir kimyasal tedavi ve sindirim yayılma olmadan birincil kültür karışık oldu. Son astrosit saflık fibrobasts F…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Bu çalışmada, FMMU yeni bir temel ve kısmen NIH finansman bulma desteklenmiştir.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
DMEM(high glucose)   Invitrogen 10313-039  
L15 medium   Invitrogen 11415-114  
FBS   Invitrogen 10437-077  
Neurobasal Medium   Invitrogen 21103-049  
poly-lysine   Sigma P4832 culture grade
NGF(2.5S)   Invitrogen 13257-019  
B27 supplyment   Invitrogen 17504-044  
0.25% trypsin-EDTA   Invitrogen 25200-056  
FUDR   Sigma F0503  
neurofilament antibody   Abcam ab24575  

References

  1. Rossignol, S., Schwab, M., Schwartz, M., Fehlings, M. G. Spinal cord injury: time to move?. J Neurosci. 27 (44), 11782-11792 (2007).
  2. Yiu, G., He, Z. Glial inhibition of CNS axon regeneration. Nat Rev Neurosci. 7 (8), 617-627 (2006).
  3. Barres, B. A. The mystery and magic of glia: a perspective on their roles in health and disease. Neuron. 60 (3), 430-440 (2008).
  4. Matyash, V., Kettenmann, H. Heterogeneity in astrocyte morphology and physiology. Brain Res Rev. , (2009).
  5. Wanner, I. B., Deik, A., Torres, M., Rosendahl, A., Neary, J. T., Lemmon, V. P., Bixby, J. L. A new in vitro model of the glial scar inhibits axon growth. Glia. 56 (15), 1691-1709 (2008).
  6. Kuffler, D. P., Sosa, I. J., Reyes, O. Schwann cell chondroitin sulfate proteoglycan inhibits dorsal root ganglion neuron neurite outgrowth and substrate specificity via a soma and not a growth cone mechanism. J Neurosci Res. 87 (13), 2863-2871 (2009).
  7. Kleitman, N., Wood, P. M., Bunge, R. P. Tissue culture method for the study of myelination. Culturing nerve cells. , P559-P559 (1998).

Play Video

Cite This Article
Xu, H., Gou, L., Dong, H. Study Glial Cell Heterogeneity Influence on Axon Growth Using a New Coculture Method. J. Vis. Exp. (43), e2111, doi:10.3791/2111 (2010).

View Video