Visualisering av Larvernas segment nerver i 3 RD Instar Drosophila Larvernas Förberedelser
Summary
Drosophila melanogaster larver ger en idealisk modell för att undersöka mekanismerna för axonal transport inom larver segmentell nerver. Med hjälp av detta förfarande kan 3: e INSTAR larver bär olika mutationer kan jämföras med vild typ larver.
Abstract
Drosophila melanogaster framstår som en kraftfull modell för att studera utveckling och funktion av nervsystemet, framför allt på grund av dess praktiska genetik och fullt sekvenseras genomet. Dessutom är larver nervsystemet ett idealiskt modellsystem för att studera mekanismer för axonal transport som larver segmentella nerver innehåller buntar av axoner med sin cell kroppar ligger i hjärnan och deras nervterminalerna slut längs kroppen. Här beskriver vi proceduren för visualisering av synaptiska vesikler proteiner inom larver segmentell nerver. Om det görs på rätt sätt, alla komponenter av nervsystemet, tillsammans med tillhörande vävnader som muskler och NMJs, förblir intakt, oskadad, och redo att visualiseras. 3: e INSTAR larver bär olika mutationer är dissekeras, fasta, inkuberas med synaptiska vesikler antikroppar, visualiseras och jämfört med vild typ larver. Detta förfarande kan anpassas för flera olika synaptic eller neuronala antikroppar och förändringar i fördelningen av en mängd olika proteiner kan lätt observeras inom larver segmentell nerver.
Protocol
Discussion
Den Drosophila larver segmentella nerver är ett kraftfullt system för att studera mekanismer i axonal transport. Om den 3: e INSTAR larver dissektion utförs korrekt, kan alla delar av CNS, PNS och tillhörande vävnad, såsom muskler och NMJs, prövas i en enda larv. Vi har anpassat detta protokoll från en publicerad av Hurd och Saxton (1996). Detta protokoll kan också anpassas för att testa andra neuronala antikroppar, men optimering av antikroppar bör göras. Den primära och sekundära anti…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
SG stöds av medel från State University of New York at Buffalo och från John R. Oishei Foundation.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools, Inc. | 11252-20 | ||
| Minutien Pins, Stainless Steel | Fine Science Tools, Inc. | 26002-10 | ||
| Mcpherson-Vannas Straight Blade 8cm Scissors | Fisher Scientific | 50822236 | ||
| Vectashield, Mounting Medium | Vector Laboratories, Inc. | H-1000 | ||
| Sylgard 184 Silicone elastomer | Dow Corning Corporation | 4026148 | ||
| formaldehyde, 16% | Electron Microscopy Sciences | 15710 | ||
| dCSP3 | Developmental Studies Hybridoma Bank | |||
| Alexa Fluor 568 Goat Anti-Mouse IgG | Invitrogen | A-11004 |
References
- Gunawardena, S., Goldstein, L. Disruption of Axonal Transport and Neuronal Viability by Amyoid Precursor Protein Mutations in Drosophila. Neuron. 32 (2), 389-401 (2001).
- Gunawardena, S., Her, L. S., Brusch, R. G., Laymon, R. A., Niesman, I. R., Gordesky-Gold, B., Sintasath, L., Bonini, N. M., Goldstein, L. S. Disruption of axonal transport by loss of huntingtin or expression of pathogenic polyQ proteins in Drosophila. Neuron. 40 (1), 1-2 (2003).
- Hurd, D. D., Saxton, W. M. Kinesin mutations cause motor neuron disease phenotypes by disrupting fast axonal transport in Drosophila. 유전학. 144 (3), 1075-1085 (1996).
- Zinsmaier, K. E., Eberle, K. K., Buchner, E., Walter, N., Benzer, S. Paralysis and early death in cysteine string protein mutants of Drosophila. Science. 263, 977-980 (1994).
