在调节Toll样受体激活Neu1唾液酸酶活动的检测
Summary
唾液酸酶检测是一个简单的技术方法，将澄清新颖的TLR传感器，微生物感染和参与活巨噬细胞的细胞表面受体水平的炎症性疾病的分子机制（S）。
Abstract
哺乳动物Toll样受体（TLRs）是一种受体识别病原体相关分子模式的家庭。不仅是TLRs的关键传感器，微生物（如病毒，细菌和寄生虫）的感染，他们也发挥了重要作用，在传染病，炎症性疾病，并可能在自身免疫性疾病的病理生理。因此，对传染病的TLR反应的强度和持续时间必须严格控制。因此，了解传感器的受体，其配体的相互作用和信号元件结构的完整性是至关重要的，为后续的免疫保护。它也将提供重要的机遇，通过传感器操纵的疾病修饰。 TLR的传感器的信号通路虽然是很好的特点，控制参数仍然不明确的传感器及其配体之间的相互作用。最近，我们确定其天然配体，它过去一直没有被观察到1,2的一个新的机制激活的TLR 。这表明，配体诱导的TLR激活紧紧Neu1唾液酸酶的激活控制。我们还报道，Neu1紧紧调节神经营养因子受体TrkA的和TrkB 3，涉及Neu1和基质金属蛋白酶9（MMP – 9）与受体4复杂的串扰。唾液酸酶检测已初步找到Neu4唾液酸酶的激活的巨噬细胞，树突状细胞和成纤维细胞通过G蛋白偶联受体Gαi蛋白和MMP – 9 5的细胞表面上一种新的配体，thymoquinone，。的TLR受体，我们的数据表明，已经在复杂的Neu1唾液酸与TLR – 2，-3和-4受体，无论是受体的配体结合后引起的。激活Neu1唾液酸酶水解唾液酸α- 2 ,3 -联β-半乳糖残基配体遥远约束力删除TLR – 4的二聚体，MyD88/TLR4复杂的招聘，NFKB的激活和促炎症细胞反应的空间位阻。在一个协作的报告中，已被证明Neu1唾液酸酶，调节巨噬细胞的6细胞的吞噬功能。两者合计，唾液酸酶检测配体诱导的受体激活的分子机制提供了强大的见解。虽然Neu1唾液酸酶和激活的TLR之间的确切关系，蒂尔克受体尚未被完全阐明，这将意味着一个新的或创新性解决方案，细胞调控途径。
Protocol
Discussion
使用新开发的检测，检测现场的巨噬细胞的唾液酸酶的活性，我们用这种技术在现场检测唾液酸酶的活性，配体诱导的唾液酸酶的活性BMC – 2呈剂量依赖性，以及在现场的巨噬细胞的DC – 2.4树突状细胞HEK-TLR4/MD2，HEK293，SP1的乳腺腺癌细胞，人类的WT和1140F01和WG0544型我sialidosis成纤维细胞。抑制神经氨酸酶抑制剂，如达菲（奥司他韦磷酸盐）在现场thymoquinone诱导唾液酸酶的活性的IC 50的0.0194μMBM…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
刘健的赠款部分支持是从自然科学和工程研究理事会（NSERC），加拿大，哈利Botterell基金会神经科学的研究，弧，和加菲猫凯利心血管病研究和发展基金。 SRA是一个皇后大学研究奖和罗伯特J.威尔逊奖学金获得者。 PJ是女王的研究生奖和罗伯特J.威尔逊奖学金收件人。 AG和SA接受女王的研究生奖。 SF是科技（OGSST）安大略研究生奖学金的收件人。公司是皇后富兰克林蕨菜研究生奖学金的收件人。 SA是女王的RS麦克劳克林研究生奖学金获得者。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Gibco, Rockville, MD | |||
| 4-MUNANA | Biosynth International Inc., Itasca, IL, USA | |||
| Fetal calf serum | HyClone, Logan, Utah, USA | |||
| DakoCytomation, Fluorescent Mounting Media | DAKO North America, Inc., Carpintenia, CA | S3023 | 15 mL | |
| Tamiflu (Oseltamivir Phosphate) | Hoffman La Roche |
References
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