Обнаружение Neu1 сиалидазы активность в регулировании Toll-подобных рецепторов активации
Summary
Сиалидазы анализа является простой технический подход, который позволит выяснить роман молекулярный механизм (ы) TLR датчиков микробной инфекции и участие в воспалительных заболеваний на уровне рецепторов на поверхности клетки живых макрофагов.
Abstract
Млекопитающих Toll-подобные рецепторы (TLRs) представляют собой семейство рецепторов, которые распознают патоген-связанные молекулярные паттерны. Мало того, что TLRs важно датчиков микробного (например, вирусов, бактерий и паразитов) инфекции, они также играют важную роль в патофизиологии инфекционных заболеваний, воспалительных заболеваний, и, возможно, при аутоиммунных заболеваниях. Таким образом, интенсивность и продолжительность TLR ответы с инфекционными болезнями должны быть под жестким контролем. Отсюда следует, что понимание структурной целостности датчиков-рецепторов, их взаимодействие лиганд и сигнальных компонентов имеет важное значение для последующего иммунологической защиты. Он также даст широкие возможности для модификации болезни через датчик манипуляции. Хотя сигнальные пути из TLR датчики хорошо охарактеризованы, параметры, управляющие взаимодействиями между датчиками и их лигандами до сих пор остаются плохо определены. Мы недавно выявили новый механизм активации TLR его природный лиганд, который ранее не наблюдалось 1,2. Она предполагает, что лиганд-индуцированной активации TLR жестко контролируется Neu1 сиалидазы активации. Мы также сообщили, что Neu1 жестко регулирует нейротрофинов рецепторов, как TrkA и TrkB 3, которые включают Neu1 и матричные металлопротеиназы-9 (MMP-9) перекрестные помехи в комплексе с рецепторами 4. Сиалидазы анализа была изначально использовать, чтобы найти новых лигандов, тимохинон, в активации Neu4 сиалидазы на поверхности клеток макрофагов, дендритных клеток и клеток фибробластов с помощью GPCR Gαi белков и MMP-9, 5. Для TLR рецепторы, наши данные показывают, что Neu1 сиалидазы уже в комплексе с TLR-2, -3 и -4 рецепторы, и индуцируется на связывание лигандов либо рецептора. Активированный Neu1 гидролизует сиалидазы сиалил α-2 ,3-связанных β-галактозил остатки удаленных от лиганд для удаления стерическое препятствие для TLR-4 димеризации, MyD88/TLR4 сложный набор, NFkB активации и про-воспалительных реакций клетки. В совместный доклад, Neu1 сиалидазы было показано, регулируют фагоцитоз макрофагов клетки 6. Взятые вместе, сиалидазы анализ дает нам мощные идеи для молекулярных механизмов лиганд-индуцированной активации рецептора. Хотя точной взаимосвязи Neu1 сиалидазы и активация TLR, ТРК рецепторов до сих пор не выяснена, она будет представлять новый или новаторский подход к регуляции клеточного пути.
Protocol
Discussion
Использование недавно разработанной метода обнаруживать сиалидазы активности в живых клетках макрофагов 2, мы использовали эту технологию для выявления сиалидазы деятельности в индуцированной лигандом сиалидазы деятельности в живом BMC-2 макрофагов клеток в зависимости от дозы…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Частичная поддержка грантами для MRS от естествознания и техники Научно-исследовательского совета Канады (NSERC), Гарри Botterell Фонда в области нейронаук, ARC, и Гарфилд Келли сердечно-сосудистых исследований и развития Фонда. SRA является получателем университета королевы премию исследований и Роберт Дж. Уилсон стипендий. PJ является получателем высшей премии королевы и Роберт Дж. Уилсон стипендий. А. Г. и С. являются получателями Высшей премии королевы. Ф. был удостоен стипендии Онтарио Высшее в области науки и технологий (OGSST). AG является получателем Франклин королевы стипендии Bracken Высшее. SA является получателем RS королевы стипендии Маклафлин Высшее.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Gibco, Rockville, MD | |||
| 4-MUNANA | Biosynth International Inc., Itasca, IL, USA | |||
| Fetal calf serum | HyClone, Logan, Utah, USA | |||
| DakoCytomation, Fluorescent Mounting Media | DAKO North America, Inc., Carpintenia, CA | S3023 | 15 mL | |
| Tamiflu (Oseltamivir Phosphate) | Hoffman La Roche |
References
- Amith, S. R. Neu1 desialylation of sialyl alpha-2,3-linked beta-galactosyl residues of TOLL-like receptor 4 is essential for receptor activation and cellular signaling. Cell Signal. 22, 314-324 (2010).
- Amith, S. R. Dependence of pathogen molecule-induced Toll-like receptor activation and cell function on Neu1 sialidase. Glycoconjugate Journal. 26, 1197-1212 (2009).
- Woronowicz, A. Dependence of neurotrophic factor activation of Trk tyrosine kinase receptors on cellular sialidase. Glycobiology. 17, 10-24 (2007).
- Jayanth, P., Amith, S. R., Gee, K., Szewczuk, M. R. Neu1 Sialidase and Matrix Metalloproteinase-9 Cross-talk is Essential for Neurotrophin Activation of Trk Receptors and Cellular Signaling. Cell. Signal. 22, 1193-1205 (2010).
- Finlay, T. M., Jayanth, P., Amith, S. R., Glimour, A., Guzzo, C., Gee, K., Beyaert, R., Szewczuk, M. R. Thymoquinone from nutraceutical black cumin oil activates Neu4 sialidase in live macrophage, dendritic, and normal and type I sialidosis human fibroblast cells via GPCR Gαi proteins and matrix metalloproteinase-9. Glycoconj J. 27, 329-348 (2010).
- Seyrantepe, V. Regulation of Phagocytosis in Macrophages by Neuraminidase 1. Journal of Biological Chemistry. 285, 206-215 (2010).
