Detección de actividad sialidasa Neu1 en la regulación de Toll-like receptor de activación
Summary
El ensayo sialidasa es un enfoque simple técnica que dilucidar nuevo mecanismo molecular (s) de los sensores de TLR de las infecciones microbianas y la participación en las enfermedades inflamatorias a nivel del receptor en la superficie celular de los macrófagos en vivo.
Abstract
Mamíferos receptores Toll-like (TLR) son una familia de receptores que reconocen patógenos patrones moleculares asociados. No sólo son los TLR sensores crucial de microorganismos (por ejemplo, virus, bacterias y parásitos), las infecciones, sino que también desempeñan un papel importante en la fisiopatología de las enfermedades infecciosas, enfermedades inflamatorias y, posiblemente, en las enfermedades autoinmunes. Por lo tanto, la intensidad y la duración de las respuestas TLR contra las enfermedades infecciosas deben ser estrictamente controlados. De ello se desprende que la comprensión de la integridad estructural de los receptores de sensor, sus interacciones ligando y componentes de señalización es esencial para la protección inmunológica posterior. También se ofrecen importantes oportunidades para la modificación de la enfermedad a través de la manipulación del sensor. Aunque las vías de señalización de TLR sensores están bien caracterizados, los parámetros que controlan las interacciones entre los sensores y sus ligandos todavía siguen estando mal definidas. Recientemente hemos identificado un nuevo mecanismo de activación de TLR con su ligando natural, que no ha sido observado previamente 1,2. Se sugiere que la activación inducida por ligandos TLR está estrechamente controlada por la activación de sialidasa Neu1. También se ha informado de que Neu1 bien regula los receptores de neurotrofinas como TrkA y TrkB 3, que implican Neu1 y metaloproteinasas de matriz-9 (MMP-9) cross-talk en el complejo con los receptores 4. El ensayo ha sido inicialmente sialidasa utilizar para encontrar un nuevo ligando timoquinona, en la activación de Neu4 sialidasa en la superficie celular de los macrófagos, células dendríticas y células de fibroblastos a través de proteínas GPCR Gαi y 5 de MMP-9. Para los receptores TLR, nuestros datos indican que Neu1 sialidasa ya está en el complejo con los receptores TLR-2, -3 y -4, y se induce a ligando vinculante a cualquier receptor. Activado Neu1 hidroliza sialidasa sialil α-2 ,3-β-ligado galactosil residuos lejos de unión del ligando a quitar impedimento estérico de TLR-4 dimerización, MyD88/TLR4 contratación complejos, la activación de NFkB y pro-inflamatorias respuestas de las células. En un informe de colaboración, sialidasa Neu1 se ha demostrado que regulan la fagocitosis de macrófagos 6. En conjunto, el ensayo sialidasa nos ha proporcionado ideas de gran alcance de los mecanismos moleculares de la activación del receptor inducida por ligandos. Aunque la relación precisa entre Neu1 sialidasa y la activación de TLR, los receptores Trk aún no se ha aclarado completamente, ya que implicaría un nuevo enfoque o pionero de las vías de regulación celular.
Protocol
Discussion
Utilizando el ensayo de nuevo desarrollo para detectar la actividad sialidasa en los macrófagos en vivo 2, se utilizó esta tecnología para detectar la actividad sialidasa en la actividad sialidasa inducida por ligandos en vivo BMC-2 en células de los macrófagos en forma dosis dependiente, así como en vivo DC-2.4 células dendríticas , HEK-TLR4/MD2, HEK293, SP1 células de adenocarcinoma de mama, WT humanos y 1140F01 y WG0544 células de tipo I de fibroblastos sialidosis. Inhibidores de la neuraminidasa…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Apoyo parcial de subvenciones para MRS de Ciencias Naturales e Ingeniería de Investigación de Canadá (NSERC), el Harry Botterell Fundación para Investigación de Neurociencia, ARC, y el de Investigación Cardiovascular Garfield Kelly y el Fondo para el Desarrollo. SRA es un recipiente del Premio de la Reina de Investigación de la Universidad y el Robert J. Wilson Fellowship. PJ es un recipiente de la concesión de Postgrado de la Reina y el Robert J. Wilson Fellowship. AG y SA son beneficiarios de la concesión de Postgrado de la Reina. SF fue el beneficiario de la Beca de Ontario de Posgrado en Ciencia y Tecnología (OGSST). AG es el receptor de Franklin Becas de la Reina Bracken de Posgrado. SA es el receptor de RS de Becas de la Reina McLaughlin Posgrado.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Gibco, Rockville, MD | |||
| 4-MUNANA | Biosynth International Inc., Itasca, IL, USA | |||
| Fetal calf serum | HyClone, Logan, Utah, USA | |||
| DakoCytomation, Fluorescent Mounting Media | DAKO North America, Inc., Carpintenia, CA | S3023 | 15 mL | |
| Tamiflu (Oseltamivir Phosphate) | Hoffman La Roche |
References
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- Amith, S. R. Dependence of pathogen molecule-induced Toll-like receptor activation and cell function on Neu1 sialidase. Glycoconjugate Journal. 26, 1197-1212 (2009).
- Woronowicz, A. Dependence of neurotrophic factor activation of Trk tyrosine kinase receptors on cellular sialidase. Glycobiology. 17, 10-24 (2007).
- Jayanth, P., Amith, S. R., Gee, K., Szewczuk, M. R. Neu1 Sialidase and Matrix Metalloproteinase-9 Cross-talk is Essential for Neurotrophin Activation of Trk Receptors and Cellular Signaling. Cell. Signal. 22, 1193-1205 (2010).
- Finlay, T. M., Jayanth, P., Amith, S. R., Glimour, A., Guzzo, C., Gee, K., Beyaert, R., Szewczuk, M. R. Thymoquinone from nutraceutical black cumin oil activates Neu4 sialidase in live macrophage, dendritic, and normal and type I sialidosis human fibroblast cells via GPCR Gαi proteins and matrix metalloproteinase-9. Glycoconj J. 27, 329-348 (2010).
- Seyrantepe, V. Regulation of Phagocytosis in Macrophages by Neuraminidase 1. Journal of Biological Chemistry. 285, 206-215 (2010).
