Die Injektion von dsRNA in Female A. aegypti Mosquitos

Summary

Reverse-genetische Ansätze haben sich als äußerst nützlich für die Bestimmung, welche Gene zugrunde liegenden Widerstand gegen Vektor Krankheitserreger in Mücken. Dieses Video-Protokoll zeigt eine Methode, mit der James-Labor verwendet werden, um dsRNA in weibliche A. aegypti Moskitos, die Dengue-Virus Hafen zu injizieren. Die Technik für die Kalibrierung von Injektionsnadeln, die Manipulation der Injektion Setup, und Injizieren dsRNA in den Brustkorb dargestellt.

Abstract

Reverse-genetische Ansätze haben sich als äußerst nützlich für die Bestimmung, welche Gene zugrunde liegenden Widerstand gegen Vektor Krankheitserreger in Mücken. Dieses Video-Protokoll zeigt eine Methode, mit der James-Labor verwendet werden, um dsRNA in weibliche A. aegypti Moskitos, die Dengue-Virus Hafen zu injizieren. Die Technik für die Kalibrierung von Injektionsnadeln, die Manipulation der Injektion Setup, und Injizieren dsRNA in den Brustkorb dargestellt.

Protocol

Machen Mikroinjektion Nadeln, indem Glaskapillaren. Wir verwenden eine Nadel puller von Sutter Instrument CO, (Modell P-2000). Die Nadel-Abzieher-Programm Spezifikationen sind: Hitze: 275 fil: 3 vel: 37 del: 250 pul: 125 Legen Sie ein bekanntes Volumen (zB 1 ul) von Wasser in den Nadeln und manuell die Skala mit einem feinen Sharpie. Richten Sie eine Nacheinspritzung Pokal für die Moskitos. Zuerst schneiden die äußerste Spitze weg von einer 1000 ul Pipettenspit…