禽流感胚胎瓣膜祖细胞的分离和培养
Summary
本文将提供一个隔离的方法，培养鹌鹑鸡HH14<sup> -</sup>阀心内膜细胞及间质细胞HH25阀垫。
Abstract
正确的形成和胚胎心脏瓣膜的功能的发育进程的关键。早期胚胎的心脏是一个U形管的心内膜心肌包围。心肌细胞分泌的心脏果冻，一个透明质酸丰富的胶质基质，到房室交界处和流出道（OFT）流明。在第一阶段开始HH14 valvulogenesis内膜细胞的一个子集时，从心肌收到的信号，经过内膜间质转化（EMT），并侵入心脏果冻。阶段HH25瓣膜垫子mesenchymalized，这是间质细胞，最终形成的心脏瓣膜和室间隔仪器。了解启动和调节EMT和细胞分化过程中的机制是非常重要的，因为严重的先天性心脏缺陷的连接。在这项研究中，我们目前的方法来隔离前EMT的心内膜和后EMT的间质细胞，这是两个不同的细胞表型prevalvular垫。前EMT的心内膜细胞可以培养的心肌有或没有。后EMT的影音垫间质细胞可以培养的胶原凝胶内机械限制或无压力。这些在体外模型的三维模拟关键瓣膜形态发生事件和解构早期和晚期valvulogenesis的机制非常有用。
Protocol
Discussion
阶段HH14隔离内膜细胞的方法 -心中最初是由润和Markwald开发提供了控制，在体外环境研究的因素，启动和调节胚胎EMT的2。 HH14 –培养无心肌内膜植不会发生EMT的无生物力学或生化干预。如果心肌左外植体，它会发出信号内膜细胞的一个子集来进行间质改造，但外部因素可能会规范这一过程。胚胎祖细胞间质隔离HH25影音阀垫使用屠夫等人所描述的方法提供了一?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
支持这项研究是由哈特韦尔基金会，美国心脏协会（科学家发展津贴＃0830384N）和基金会Leducq：二尖瓣07CVD04。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Extra fine Bonn scissors, curved | Fine Science Tools | 14085-08 | ||
| Dumont tweezers #55 | World Precision Instruments, Inc. | 14099 | ||
| Dumont tweezers #5 | World Precision Instruments, Inc. | 14098 | ||
| Sterile transfer pipettes | Samco Scientific | 2041S | ||
| 4-well culture plates | Nunc | 176740 | ||
| Sterile disposable filter units, PES, 0.2 μm pore size membrane | Nalgene | 566-0020 | ||
| Sterile 15 mL centrifuge tubes | Corning | 430828 | ||
| Sterile petri dishes, 100 mm x 15 mm | VWR International | 25384-342 | ||
| Laboratory tape | VWR International | 89097-920 | ||
| Rat-tail collagen I | BD Biosciences | 354236 | ||
| 10X Earl’s Balanced Salt Solution | Quality Biological, Inc. | 119-064-131 | ||
| M199 powder | Invitrogen | 31100-035 | ||
| Penicillin-Streptomycin | Invitrogen | 15140-122 | ||
| Insulin-Transferrin-Selenium-G supplement (100X) | Invitrogen | 41400-045 | ||
| Chicken serum | Invitrogen | 16110-082 | ||
| 0.25% Trypsin-EDTA | Invitrogen | 25200-056 | ||
| Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S5761 | ||
| Sodium hydroxide solution, 1.0 N | Sigma-Aldrich | S2770 | ||
| Fertile quail eggs (Coturnix coturnix) | Lake Cumberland Game Bird Farm | |||
| Fertile chicken eggs (Gallus gallus) | Cornell University Poultry Farm |
References
- Hamburger, V., Hamilton, H. L. A series of normal stages in the development of the chick embryo. J Morphol. 88, 49-92 (1951).
- Runyan, R. B., Markwald, R. R. Invasion of mesenchyme into three-dimensional collagen gels: A regional and temporal analysis of interaction in embryonic heart tissue. 발생학. 95, 108-108 (1983).
- Butcher, J. T., Norris, R. A., Hoffman, S., Mjaatvedt, C. H., Markwald, R. R. Periostin promotes atrioventricular mesenchyme matrix invasion and remodeling mediated by integrin signaling through Rho/PI 3-kinase. 발생학. 302, 256-256 (2007).
