Preparação de tendões da cauda de rato de Estudos biomecânicos e Mechanobiological
Summary
Este artigo descreve os procedimentos experimentais usados para preparar os tendões da cauda de rato para estudos biomecânicos e mechanobiological. Várias características dos principais passos na preparação são demonstrados, começando com a extração, transversal medição da área, lavagem e carregamento na câmara biorreator.
Abstract
Tendões de ratos de cauda (RTTs) são um modelo comum biológicos utilizados em estudos experimentais in vitro nas áreas de fisiologia do tendão e tendinopatia. Trabalhando com esses tecidos é um desafio, porque eles são muito frágeis, e até agora não havia nenhum protocolo rigorosamente detalhadas para o seu isolamento.
Diante desses desafios, temos desenvolvido métodos e instrumentos para facilitar a manipulação de RTTs e tecido controle de viabilidade esterilidade e integridade. Este artigo descreve os procedimentos experimentais usados para preparar RTTs para estudos biomecânicos e mechanobiological. Nosso trabalho é dividido em quatro etapas principais: extração, transversal medição da área, lavagem e carregamento na câmara biorreator.
A cada passo, todos os procedimentos, materiais e manipulações são apresentados em detalhe, para que possam ser facilmente reproduzidos. Além disso, os instrumentos específicos desenvolvidos são apresentados: uma placa de manipulação usada para segregar RTTs, um micrômetro óptico para posicionar o tecido durante a medição da área transversal e um sistema de ancoragem para fixar a RTTs em um biorreator.
Por fim, descrevemos os resultados obtidos após vários testes para validar os nossos métodos. Avaliações a viabilidade de esterilidade e integridade demonstrar que os nossos procedimentos são suficientemente rigorosas para manipulações de tecidos frágeis, como os tendões da cauda de rato.
Protocol
Discussion
Aplicando os procedimentos experimentais, podemos realizar uma grande variedade de estudos in vitro sobre este tipo de tecidos. Como por exemplo, um estudo sobre a degeneração do tecido foi realizada pela aplicação de sub-estimulação para RTTs por um período de 10 dias. Cada dia, nós avaliamos as propriedades mecânicas do tecido em ensaios não-destrutivos de relaxamento stress. No final, pudemos observar variação de tensão RTT e, portanto, analisar a evolução das propriedades mecânicas….
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este artigo foi apoiada pelo Grant NSERC # 299280, IRSST como uma bolsa de estudos para G. Pais e FRSQ como um prêmio de graduação de estudantes de pesquisa para M. Cyr. Agradecemos a Yoan Lemieux-Laneville para realizar as manipulações gravadas em vídeo.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| D-PBS | Reagent | Wisent inc. | 311-410-CL | Saline solution |
| Glucose | Reagent | Wisent inc. | 609-037-EL | Saline solution
1g/L |
| Antibiotics-antimycotics | Reagent | Invitrogen Corp. | 15240-062 | Saline solution
1% |
| DMEM | Reagent | Invitrogen Corp. | 12800-017 | Culture solution |
| Sodium Bicarbonate | Reagent | Wisent inc. | 600-105-CG | Culture solution 3.7g/L |
| FBS | Reagent | Wisent inc. | 090150 | Culture solution 10% |
| Antibiotics-antimycotics | Reagent | Invitrogen Corp. | 15240-062 | Culture solution 1% |
| Optic Micrometer | Tool | Custom-made | ||
| Manipulation plate | Tool | Custom-made | ||
| Bioreactor chamber | Tool | Custom-made |
References
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