تصنيع الأنسجة الصغيرة باستخدام وحدات من الخلايا التي تحتوي على الكولاجين جل
Summary
وهي مغلفة خلق الدقيقة أنسجة الكولاجين باستخدام المواد الهلامية اسطوانية ، تسمى وحدات ، والتي تحتوي على الخلايا المدمجة والتي السطح مع الخلايا البطانية.
Abstract
يصف هذا البروتوكول تصنيع نوع من الأنسجة الصغيرة تسمى الوحدات. نهج الوحدة يولد موحدة ، والأنسجة وقابلة للأوعية دموية. يمكن جعل وحدات من الكولاجين وكذلك غيرها من المواد أو gelable crosslinkable. وهم حوالي 2 ملم وطولها 0.7 ملم وقطرها على تلفيق ولكن تقليص الحجم مع الخلايا المدمجة أو عندما تكون مغلفة وحدات مع الخلايا البطانية. وحدات فردية وصغيرة بما يكفي أن الخلايا المضمنة في حدود انتشار الأوكسجين والمواد المغذية الأخرى ولكن يمكن أن تكون معبأة معا لتكوين وحدات أكبر الأنسجة التي perfusable. هذه الأنسجة هي وحدات في البناء لأنه لا يمكن أن تكون جزءا لا يتجزأ من أنواع مختلفة من الخلايا أو المغلفة على الوحدات قبل أن يتم تعبئتها معا لتكوين أنسجة معقدة. هناك ثلاث خطوات رئيسية لجعل وحدات : (1) تحييد خلايا الكولاجين وتضمينها في ذلك ، (2) التبلور الكولاجين في أنبوب والقطع وحدات و (3) وحدات الطلاء مع الخلايا البطانية.
Protocol
Discussion
ونحن ملفقة عدة مختلفة الدقيقة الأنسجة باستخدام الوحدات المدمجة مع أنواع مختلفة من الخلايا 11/01. لقد نجحنا في تضمين العضلية الأولية ، والجزر ، والخلايا الجذعية الدهنية وخلايا انسجة الوسيطة وكذلك خطوط الخلية عدة بما في ذلك HepG2 ، NIH 3T3 واستنساخ خلايا الكبد 9. لقد كنا …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Intramedic tubing PE60 | Becton Dickson | 427416 | Different diameter of tubing can be used to change the diameter of the modules | |
| Phosphate-buffered saline (PBS) | Gibco | 20012-027 | ||
| Trypsin-EDTA | Gibco | 25200-072 | ||
| Purcol acidificed collagen, 3 mg/mL | Cedarlane | 5005-B | ||
| Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S5761 | ||
| 20G needle | Becton Dickson | 305175 | Diameter of the needle needs to be similar to the diameter of the tubing | |
| 3 mL syringe | BD Biosciences | 309585 | ||
| 15 mL tube | BD Biosciences | 352096 | ||
| 50 mL tube | BD Biosciences | 352070 | ||
| Convertors Self-Seal Pouch 7 1/2” x 13” | Cardinal Health | 92713 | ||
| 10 ml Wide Tip serological pipet | BD Falcon | 357504 | ||
| 10 ml serological pipet | BD Falcon | 357551 | ||
| 5 ml serological pipet | BD Falcon | 357543 |
References
- Chamberlain, M. D., Gupta, R., Sefton, M. V. Chimeric vessel tissue engineering driven by endothelialized modules. , (2010).
- Corstorphine, L. E., Sefton, M. V. Effectiveness factor and diffusion limitations in collagen gel modules containing HepG2 cells. J Tissue Eng Regen Med. , (2010).
- Gupta, R., Van Rooijen, N., Sefton, M. V. Fate of endothelialized modular constructs implanted in an omental pouch in nude rats. Tissue Eng. Part A 15, 2875-2887 (2009).
- Leung, B. M., Sefton, M. V. A modular tissue engineering construct containing smooth muscle cells and endothelial cells. Ann Biomed Eng. 35, 2039-2049 (2007).
- McGuigan, A. P., Leung, B., Sefton, M. V. Fabrication of cell-containing gel modules to assemble modular tissue-engineered constructs [corrected]. Nat Protoc. 1, 2963-2969 (2006).
- McGuigan, A. P., Sefton, M. V. Vascularized organoid engineered by modular assembly enables blood perfusion. Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 11461-11466 (2006).
- McGuigan, A. P., Sefton, M. V. Modular tissue engineering: fabrication of a gelatin-based construct. J Tissue Eng Regen Med. 1, 136-145 (2007).
- McGuigan, A. P., Sefton, M. V. Design and fabrication of sub-mm-sized modules containing encapsulated cells for modular tissue engineering. Tissue Eng. 13, 1069-1078 (2007).
- McGuigan, A. P., Sefton, M. V. Design criteria for a modular tissue-engineered construct. Tissue Eng. 13, 1079-1089 (2007).
- McGuigan, A. P., Sefton, M. V. The thrombogenicity of human umbilical vein endothelial cell seeded collagen modules. Biomaterials. 29, 2453-2463 (2008).
- Sosnik, A., Leung, B., McGuigan, A. P., Sefton, M. V. Collagen/poloxamine hydrogels: cytocompatibility of embedded HepG2 cells and surface-attached endothelial cells. Tissue Eng. 11, 1807-1816 (2005).
