माइक्रो - ऊतकों कोलेजन के मॉड्यूल का उपयोग करते हुए निर्माण की जेल युक्त कोशिकाओं
Summary
सूक्ष्म ऊतकों बेलनाकार कोलेजन जैल, मॉड्यूल कहा जाता है, कि एम्बेडेड कोशिकाओं और सतह जो होते हैं का उपयोग कर के निर्माण endothelial कोशिकाओं के साथ लेपित है.
Abstract
इस प्रोटोकॉल मॉड्यूल बुलाया सूक्ष्म ऊतकों की एक प्रकार के निर्माण का वर्णन करता है. मॉड्यूल दृष्टिकोण वर्दी, स्केलेबल और vascularized ऊतकों उत्पन्न करता है. मॉड्यूल कोलेजन के रूप में के रूप में अच्छी तरह से अन्य gelable या crosslinkable सामग्री का बनाया जा सकता है. वे निर्माण पर व्यास में लंबाई में लगभग 2 मिमी और 0.7 मिमी हैं, लेकिन एम्बेडेड कोशिकाओं या जब मॉड्यूल endothelial कोशिकाओं के साथ लेपित हैं के साथ आकार में छोटा है. व्यक्तिगत मॉड्यूल काफी छोटे हैं कि एम्बेडेड कोशिकाओं को ऑक्सीजन और अन्य पोषक तत्वों के प्रसार सीमा के भीतर हैं, लेकिन मॉड्यूल के साथ पैक किया जा सकता है बड़ा ऊतकों कि perfusable हैं फार्म. इन ऊतकों के निर्माण में मॉड्यूलर हैं क्योंकि विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं में एम्बेडेड जा सकता है या मॉड्यूल लेपित पर इससे पहले कि वे एक साथ पैक कर रहे हैं करने के लिए जटिल ऊतकों फार्म हैं. वहाँ तीन मुख्य मॉड्यूल बनाने के कदम उठाए हैं: (1) कोलेजन को निष्क्रिय करने और कोशिकाओं में एम्बेड, (2) ट्यूब में कोलेजन बीच बढ़िया तालमेल और endothelial कोशिकाओं के साथ और (3) कोटिंग मॉड्यूल मॉड्यूल काटने.
Protocol
Discussion
हम कई अलग अलग सेल 1-11 प्रकार के साथ एम्बेडेड मॉड्यूल का उपयोग कर माइक्रो ऊतकों गढ़े है. हम सफलतापूर्वक प्राथमिक cardiomyocytes, islets, वसा स्टेम कोशिकाओं और mesenchymal stromal कोशिकाओं के रूप में के रूप में अच्छी तरह से HepG2, एन…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Intramedic tubing PE60 | Becton Dickson | 427416 | Different diameter of tubing can be used to change the diameter of the modules | |
| Phosphate-buffered saline (PBS) | Gibco | 20012-027 | ||
| Trypsin-EDTA | Gibco | 25200-072 | ||
| Purcol acidificed collagen, 3 mg/mL | Cedarlane | 5005-B | ||
| Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S5761 | ||
| 20G needle | Becton Dickson | 305175 | Diameter of the needle needs to be similar to the diameter of the tubing | |
| 3 mL syringe | BD Biosciences | 309585 | ||
| 15 mL tube | BD Biosciences | 352096 | ||
| 50 mL tube | BD Biosciences | 352070 | ||
| Convertors Self-Seal Pouch 7 1/2” x 13” | Cardinal Health | 92713 | ||
| 10 ml Wide Tip serological pipet | BD Falcon | 357504 | ||
| 10 ml serological pipet | BD Falcon | 357551 | ||
| 5 ml serological pipet | BD Falcon | 357543 |
References
- Chamberlain, M. D., Gupta, R., Sefton, M. V. Chimeric vessel tissue engineering driven by endothelialized modules. , (2010).
- Corstorphine, L. E., Sefton, M. V. Effectiveness factor and diffusion limitations in collagen gel modules containing HepG2 cells. J Tissue Eng Regen Med. , (2010).
- Gupta, R., Van Rooijen, N., Sefton, M. V. Fate of endothelialized modular constructs implanted in an omental pouch in nude rats. Tissue Eng. Part A 15, 2875-2887 (2009).
- Leung, B. M., Sefton, M. V. A modular tissue engineering construct containing smooth muscle cells and endothelial cells. Ann Biomed Eng. 35, 2039-2049 (2007).
- McGuigan, A. P., Leung, B., Sefton, M. V. Fabrication of cell-containing gel modules to assemble modular tissue-engineered constructs [corrected]. Nat Protoc. 1, 2963-2969 (2006).
- McGuigan, A. P., Sefton, M. V. Vascularized organoid engineered by modular assembly enables blood perfusion. Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 11461-11466 (2006).
- McGuigan, A. P., Sefton, M. V. Modular tissue engineering: fabrication of a gelatin-based construct. J Tissue Eng Regen Med. 1, 136-145 (2007).
- McGuigan, A. P., Sefton, M. V. Design and fabrication of sub-mm-sized modules containing encapsulated cells for modular tissue engineering. Tissue Eng. 13, 1069-1078 (2007).
- McGuigan, A. P., Sefton, M. V. Design criteria for a modular tissue-engineered construct. Tissue Eng. 13, 1079-1089 (2007).
- McGuigan, A. P., Sefton, M. V. The thrombogenicity of human umbilical vein endothelial cell seeded collagen modules. Biomaterials. 29, 2453-2463 (2008).
- Sosnik, A., Leung, B., McGuigan, A. P., Sefton, M. V. Collagen/poloxamine hydrogels: cytocompatibility of embedded HepG2 cells and surface-attached endothelial cells. Tissue Eng. 11, 1807-1816 (2005).
