Изготовление Micro-тканей с использованием модулей Коллаген гель, содержащий клетки
Summary
Создание микро-тканей с использованием цилиндрической гели коллагена, называемых модулей, которые содержат встроенные клетки и поверхность которого покрыта эндотелиальных клеток.
Abstract
Этот протокол описывает изготовление типа микро-ткани называются модулями. Модульный подход создает единый, масштабируемый и васкуляризированной тканей. Модули могут быть изготовлены из коллагена, а также других gelable или сшиваемых материалов. Они примерно в 2 мм в длину и 0,7 мм в диаметре при изготовлении, но уменьшаться в размерах со встроенными клетками или когда модули покрыты эндотелиальных клеток. Модулей в отдельности достаточно малы, что встроенный клетки находятся в пределах диффузионного предела кислород и другие питательные вещества, но модули могут быть упакованы вместе, чтобы сформировать большие тканей, которые perfusable. Эти ткани имеют модульную в строительстве, потому что разные типы клеток могут быть встроены в систему или нанесенным на модули, прежде чем они упакованы вместе, чтобы сформировать комплекс тканей. Существуют три основные шаги создания модулей: (1) нейтрализующие коллагена и вложение клетки в ней, (2) гелеобразования коллагена в трубку и резки модулей и (3) покрытия модулей с эндотелиальных клеток.
Protocol
Discussion
Мы изготовили несколько различных микро-тканей с использованием модулей с встроенной различных типов клеток 1-11. Мы успешно внедренный первичных кардиомиоцитов, островков, клетки жировой стволовых и мезенхимальных стромальных клеток, а также нескольких клеточных линий, включая…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Intramedic tubing PE60 | Becton Dickson | 427416 | Different diameter of tubing can be used to change the diameter of the modules | |
| Phosphate-buffered saline (PBS) | Gibco | 20012-027 | ||
| Trypsin-EDTA | Gibco | 25200-072 | ||
| Purcol acidificed collagen, 3 mg/mL | Cedarlane | 5005-B | ||
| Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | S5761 | ||
| 20G needle | Becton Dickson | 305175 | Diameter of the needle needs to be similar to the diameter of the tubing | |
| 3 mL syringe | BD Biosciences | 309585 | ||
| 15 mL tube | BD Biosciences | 352096 | ||
| 50 mL tube | BD Biosciences | 352070 | ||
| Convertors Self-Seal Pouch 7 1/2” x 13” | Cardinal Health | 92713 | ||
| 10 ml Wide Tip serological pipet | BD Falcon | 357504 | ||
| 10 ml serological pipet | BD Falcon | 357551 | ||
| 5 ml serological pipet | BD Falcon | 357543 |
References
- Chamberlain, M. D., Gupta, R., Sefton, M. V. Chimeric vessel tissue engineering driven by endothelialized modules. , (2010).
- Corstorphine, L. E., Sefton, M. V. Effectiveness factor and diffusion limitations in collagen gel modules containing HepG2 cells. J Tissue Eng Regen Med. , (2010).
- Gupta, R., Van Rooijen, N., Sefton, M. V. Fate of endothelialized modular constructs implanted in an omental pouch in nude rats. Tissue Eng. Part A 15, 2875-2887 (2009).
- Leung, B. M., Sefton, M. V. A modular tissue engineering construct containing smooth muscle cells and endothelial cells. Ann Biomed Eng. 35, 2039-2049 (2007).
- McGuigan, A. P., Leung, B., Sefton, M. V. Fabrication of cell-containing gel modules to assemble modular tissue-engineered constructs [corrected]. Nat Protoc. 1, 2963-2969 (2006).
- McGuigan, A. P., Sefton, M. V. Vascularized organoid engineered by modular assembly enables blood perfusion. Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 11461-11466 (2006).
- McGuigan, A. P., Sefton, M. V. Modular tissue engineering: fabrication of a gelatin-based construct. J Tissue Eng Regen Med. 1, 136-145 (2007).
- McGuigan, A. P., Sefton, M. V. Design and fabrication of sub-mm-sized modules containing encapsulated cells for modular tissue engineering. Tissue Eng. 13, 1069-1078 (2007).
- McGuigan, A. P., Sefton, M. V. Design criteria for a modular tissue-engineered construct. Tissue Eng. 13, 1079-1089 (2007).
- McGuigan, A. P., Sefton, M. V. The thrombogenicity of human umbilical vein endothelial cell seeded collagen modules. Biomaterials. 29, 2453-2463 (2008).
- Sosnik, A., Leung, B., McGuigan, A. P., Sefton, M. V. Collagen/poloxamine hydrogels: cytocompatibility of embedded HepG2 cells and surface-attached endothelial cells. Tissue Eng. 11, 1807-1816 (2005).
