Microscopia intravital de la microcirculación del cerebro del ratón con una ventana craneal cerrado
Summary
Microscopia intravital para seguir los acontecimientos hemodinámicos e inflamatorios temporal y espacial en la microcirculación pial.
Abstract
Este modelo experimental fue diseñado para evaluar la microcirculación del ratón pial en aguda y crónica, hemodinámicos fisiológicos y fisiopatológicos, las enfermedades inflamatorias y metabólicas, el uso de microscopía de fluorescencia in vivo. Una ventana craneal cerrado se coloca sobre la izquierda parieto-occipital la corteza de los ratones. Microcirculación local se registra en tiempo real a través de la ventana con epi e iluminación de fluorescencia, y las mediciones de los diámetros de los vasos y de glóbulos rojos (RBC) velocidades se llevan a cabo. RBC velocidad se mide en tiempo real mediante la correlación cruzada y / o hematíes marcadas con fluorescencia. Adhesión de leucocitos y plaquetas a los vasos piales y la evaluación de la perfusión y la permeabilidad vascular se realizan con la ayuda de los marcadores de fluorescencia etiquetados, como los anticuerpos albúmina-FITC y anti-CD45 TxR. Microcirculación pueden ser grabados en vídeo varias veces durante varios días. Se utilizó por primera vez la ventana de microscopía intravital cerca del cerebro para estudiar la microcirculación pial para seguir los cambios dinámicos en el curso de la infección por Plasmodium berghei ANKA en ratones y muestran que la expresión de la CM se asocia con trastornos de la microcirculación se caracteriza por la vasoconstricción, la profunda disminución de la sangre el flujo vascular y eventualmente colapsar.
Protocol
Discussion
El método de microscopía intravital aquí descrito proporciona una herramienta única y poderosa para la observación detallada de la microcirculación pial en el ratón. Permite singularizar a las arteriolas y vénulas individuales y medir los cambios de una serie de parámetros tales como los diámetros de vasos, las velocidades de RBC, el flujo sanguíneo, la adherencia y la rodadura de los leucocitos, plaquetas y otros elementos de la sangre, la pérdida vascular, el pH del tejido y la pO2 y muchos otros posibles …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo fue apoyado por becas-R01 HL87290, R01-S1-HL87290 y R01-AI082610 de los Institutos Nacionales de Salud para LJMC.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Isoflurane | Baxter | FDG9623 | ||
| Carbocyanine dye Dil | Molecular Probes | D306 | ||
| Albumin-FITC | Sigma-Aldrich | A9771 | ||
| Anti-CD45-TxR Ab | Invitrogen | MCD4517 | ||
| P. berghei ANKA-GFP | MR4 | MRA-865 |
References
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