Знание молекулярных механизмов, лежащих вкусовой трансдукции в последнее время пользуются значительные успехи, в значительной степени в связи с использованием животных моделей. Тем не менее, широкое разнообразие по чувствительности и специфичности вкуса у млекопитающих ордера исследования в тканях человека. Мы опишем метод биопсии собирать живые клетки вкус от сосочков на человеческом языке.
Abstract
Чувство вкуса имеет решающее значение для жизни человека. Он информирует орган о качестве продуктов питания, которые будут потенциально внутрь и стимулирует обменные процессы, которые готовят желудочно-кишечного тракта для переваривания пищи. Устойчивый прогресс на пути к пониманию ранних биохимических и молекулярных событий, основной вкус трансдукции (для обзора, Бреслин и Спектор, 2008 1). Однако прогресс на сегодняшний день в значительной степени результатом животных моделях. Тем не менее, поскольку заметные различия в специфичности рецептора и плотность рецепторов отличаться для разных видов человеческой трансдукции вкус быть поняты только с помощью ткани человека вкус. Здесь мы опишем технику биопсии для сбора человека fungiform сосочков, видны как округлые розовые передних структурах, около 0,5 мм в диаметре, которые содержат вкусовые рецепторы. Эти биопсию сосочков используются для нескольких целей, включая изоляцию жизнеспособных клеток почки вкус, на месте гибридизация, иммуногистохимии, а через методы молекулярной биологии, выявление вкусо-специфических белков романа.
Protocol
1. Введение и общие соображения Общая процедура включает в себя местную анестезию небольшой (1 см 2) области дорсальной поверхности передней языке, с последующим удалением числа (6-8) из fungiform (вкус) сосочки от наркоза области с помощью изогнутого весной микро -ножницы (M…
Discussion
Заметным преимуществом использования человеческих клеток является их специфичность. Процедура, описанная здесь подробно обеспечивает язык ткани для изоляции вкус рецепторных клеток от людей. Эти вкусовые клетки могут быть использованы для молекулярных исследований, стремясь обнар?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа была поддержана NIH R21 DC03969-01 (в JGB). Мы благодарим д-р Фриц Lischka для захвата одной вкусовой рецептор клеток, доктором Tauf Huque для проведения ПЦР показано на рисунке 4В и г-н Д. Бейли и г-жа С. Аларкон для оказания технической помощи. М. Янина Пепино является членом поддерживается NIDAT32 DA07313 Вашингтон школы медицины университета в Сент-Луисе, штат Миссури (Cottler, Л. П.).
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
McPherson-Vannas. Curved, sharp cutting edge 5mm. Comb, tip width 0.2 mm overall length 3″
Roboz Surgical Instruments Co., Inc. Gaithersburg, MD 20898
MacDonald, J. F., Mody, I., Salter, M. W., Spielman, A. I., Spielman, A. I., Brand, J. G. Patch-clamping of taste cells in mouse.Experimental Cell Biology of Taste and Olfaction. , 329-332 (1995).
Spielman, A. I., Pepino, M. Y., Feldman, R., Brand, J. G. Technique to Collect Fungiform (Taste) Papillae from Human Tongue. J. Vis. Exp. (42), e2201, doi:10.3791/2201 (2010).