एक सेल सेल macromolecular परिवहन परख Planta Biolistic बमबारी
Summary
संयंत्र कोशिकाओं के बीच macromolecular तस्करी transiently ब्याज की एक प्रोटीन fluorescently टैग व्यक्त और confocal माइक्रोस्कोपी द्वारा अपने अंतर और कहनेवाला वितरण का विश्लेषण करके मूल्यांकन किया जा सकता है.
Abstract
यहाँ, हम एक सरल और तेजी से सेल सेल Planta में macromolecular परिवहन की सीमा का पता लगाने और आकलन के लिए प्रोटोकॉल उपस्थित थे. इस प्रोटोकॉल में, एक fluorescently ब्याज की टैग प्रोटीन transiently अपने एन्कोडिंग डीएनए के biolistic निर्माण प्रसव के बाद संयंत्र के ऊतकों में व्यक्त किया. टैग प्रोटीन का अंतर और कहनेवाला वितरण तो confocal माइक्रोस्कोपी द्वारा विश्लेषण किया है. हम विस्तार में इस प्रौद्योगिकी का वर्णन है, परख के लिए कदम दर कदम प्रोटोकॉल प्रदान करने और तीन प्रजातियों के पौधे में symplastic प्रोटीन परिवहन की हद तक, Arabidopsis thaliana, Nicotiana benthamiana और एन का मूल्यांकन tabacum (तम्बाकू).
Protocol
Discussion
symplastic परिवहन परख की सफलता के लिए कुंजी को उच्च परिवर्तन दक्षता है, जो सांख्यिकीय महत्वपूर्ण है और आसानी से detectible संकेत समूहों के उत्पादन की अनुमति देता प्राप्त है. यह स्वस्थ, मजबूत पौधों से काटा पत्तियों क…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हमारा काम NIH / NIGMS, NSF, USDA NIFA /, और चारण से कुलपति को अनुदान द्वारा समर्थित है.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Gold microparticles, 1.0 μm in diameter | Bio-Rad | 165-2262 | ||
| Gold microparticles, 0.6 μm in diameter | Bio-Rad | 165-2263 | ||
| Spermidine | Sigma | S0266-1G | ||
| Tefzel tubing | Bio-Rad | 165-2441 | ||
| Helios cartridge preparatory station | Bio-Rad | 165-2420 | ||
| Tubing cutter | Bio-Rad | 165-2422 | ||
| Helios gene gun | Bio-Rad | 165-2432 | ||
| Helium gas regulator | Bio-Rad | 165-2413 |
References
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