휴대 전화의 Macromolecular 교통 분석 Planta에 Biolistic 포격을 활용
Summary
식물 세포 사이 Macromolecular 거래는 transiently 관심 찬란 – 태그 단백질을 표현하고 공촛점 현미경하여 내부와 세포 분포를 분석하여 평가하실 수 있습니다.
Abstract
여기, 우리는 planta에서 휴대 전화의 macromolecular 수송의 범위를 감지하고 평가하는 간단하고 빠른 프로토콜을 제시한다. 이 프로토콜에 관심이 찬란 태그 단백질은 transiently의 인코딩 DNA의 전달 구조 biolistic 다음과 식물 조직에 표시됩니다. 태그 단백질의 내부 및 세포 분포는 다음 공촛점 현미경으로 분석됩니다. 우리는 분석하기 위해 단계별 절차를 제공 세부 사항이 기술을 설명하는 세 식물 종 (种)의 symplastic 단백질 수송의 범위, Arabidopsis thaliana, Nicotiana benthamiana 및 N. 평가 tabacum (담배).
Protocol
배경 식물 세포 연결을 통해 macromolecules의 Symplastic 교통, plasmodesmata는 많은 식물 병리학과 생물학에 관심이 있습니다. 예를 들어, 여러 바이러스 단백질은 바이러스 운동 1-3 있도록 plasmodesmal 크기 제외 한도를 규제하는 것으로 알려져 있습니다. 또한, 그들이 중요한 발달 규제 중 일부 내생 단백질은, 비 셀 자율적으로 4 기능, 아마도 plasmodesmata을 통해 세포에서…
Discussion
symplastic 교통 분석의 성공에 대한 열쇠는 통계적으로 중요한 쉽게 detectible 신호 클러스터의 생산을 허용 높은 변환 효율을 얻을 수 있습니다. 이것은 건강, 강력한 식물에서 수확한 잎을 사용하고 순수하고 집중 DNA 준비로 코팅된 금 입자를 준비 얻을 수 있습니다.
같은 성장 단계에서 나뭇잎을 사용하면 분석의 신뢰성을 위해 매우 중요합니다. Plasmodesmal 조리개는 differentially…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리 작품은 VC에 NIH / NIGMS, NSF, USDA / NIFA 및 바드에서 기금에 의해 지원됩니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Gold microparticles, 1.0 μm in diameter | Bio-Rad | 165-2262 | ||
| Gold microparticles, 0.6 μm in diameter | Bio-Rad | 165-2263 | ||
| Spermidine | Sigma | S0266-1G | ||
| Tefzel tubing | Bio-Rad | 165-2441 | ||
| Helios cartridge preparatory station | Bio-Rad | 165-2420 | ||
| Tubing cutter | Bio-Rad | 165-2422 | ||
| Helios gene gun | Bio-Rad | 165-2432 | ||
| Helium gas regulator | Bio-Rad | 165-2413 |
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Cite This Article
Ueki, S., Meyers, B. L., Yasmin, F., Citovsky, V. A Cell-to-cell Macromolecular Transport Assay in Planta Utilizing Biolistic Bombardment. J. Vis. Exp. (42), e2208, doi:10.3791/2208 (2010).