प्राथमिक सेल संस्कृति से ड्रोसोफिला गेसट्रुला भ्रूण
Summary
हम प्राथमिक कोशिकाओं की तैयारी से अलग करने के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान<em> Drosophil</em> एक भ्रूण. बाहर प्रभावी आरएनएआई गड़बड़ी ले, अन्य आणविक, जैव रासायनिक और सेल इमेजिंग तरीकों के साथ मिलकर की क्षमता सवालों की एक किस्म में संबोधित करने की अनुमति देगा<em> ड्रोसोफिला</em> प्राथमिक कोशिकाओं.
Abstract
यहाँ हम तैयारी और संवर्धन प्राथमिक कोशिकाओं ड्रोसोफिला गेसट्रुला भ्रूण से अलग करने के लिए एक विधि का वर्णन. संक्षेप में, की एक बड़ी राशि युवा और स्वस्थ मक्खियों से भ्रूण मंचन एकत्र कर रहे हैं, निष्फल, और फिर शारीरिक रूप से एक गिलास homogenizer का उपयोग किसी एकल कक्ष निलंबन में dissociated. संस्कृति संस्कृति के माध्यम में एक उचित घनत्व या प्लेटें चैम्बर स्लाइड्स पर चढ़ाया जा रहा है के बाद, इन कोशिकाओं को आगे कई आकृति विज्ञान के अलग सेल प्रकार है, जो उनकी विशिष्ट सेल मार्कर के द्वारा पहचाना जा सकता है है में अंतर कर सकते हैं. इसके अलावा, हम डबल असहाय RNAs (डी एस) के साथ इन कोशिकाओं के इलाज के लिए जीन पछाड़ना प्रकाश में लाना करने के लिए शर्तों को प्रस्तुत करते हैं. ड्रोसोफिला प्राथमिक कोशिकाओं में कुशल आरएनएआई बस dsRNA युक्त मध्यम संस्कृति में कोशिकाओं स्नान करके पूरा किया है. बाहर प्रभावी आरएनएआई गड़बड़ी ले, अन्य आणविक जैव रासायनिक, सेल इमेजिंग विश्लेषण के साथ एक साथ करने की क्षमता, ड्रोसोफिला प्राथमिक कोशिकाओं, विशेष रूप से विभेदित मांसपेशियों और neuronal कोशिकाओं से संबंधित उन में जवाब के लिए सवालों की एक किस्म की अनुमति देगा.
Protocol
Discussion
ड्रोसोफिला कोशिकाओं के प्राथमिक संस्कृतियों के विकास पैटर्न काफी भिन्नता है, संभवतः प्राथमिक कोशिका तैयार करने की प्रक्रिया के दौरान कई चर के कारण कर सकते हैं. सबसे पहले, अंडे बिछाने के लिए इस्तेम…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
जेबी Damon Runyon कैंसर रिसर्च फाउंडेशन DRG-1716-02 फैलोशिप द्वारा समर्थित किया गया. JZ / एनआईएच NIGMS – F32 GM082174 02 फैलोशिप द्वारा समर्थित किया गया था. एनपी हॉवर्ड ह्यूजेस मेडिकल इंस्टीट्यूट के एक अन्वेषक है.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Shields and Sang M3 medium | Sigma | S3652 | ||
| Fetal bovine serum | JRH Biosciences | 12103-500M | ||
| Insulin from bovine pancreas | Sigma | I-6634 | ||
| Large embryo collection cages | Genesee Scientific | 59-101 | ||
| #25 US standard testing sieve | VWR | 57334-454 | ||
| #45 US standard testing sieve | VWR | 57334-462 | ||
| #120 US standard testing sieve | VWR | 57334-474 | ||
| Dounce tissue grinder, Wheaton 7 mL | VWR | 62400-620 | ||
| Dounce tissue grinder,Kontes 40 mL | VWR | KT885300-0040 | ||
| Dounce tissue grinder,Kontes 40 mL | VWR | KT885300-0100 | ||
| Costar, 384-well plate | VWR | 29444-078 | ||
| Lab-Tek II Chambered coverglass | Fisher Scientific | 171080 |
References
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