이 프로토콜은 녹아웃 SR의 cryopreservation 매체 인간의 IPS 세포를 cryopreserving 완벽한 마네 SR 공급기 무료 (KSR – FF) 중간 또는 피더 기반 마네의 SR 매체에서 이러한 세포를 복구하는 자세한 절차를 설명합니다.
인간과 마우스 섬유아 세포가 배아 줄기 세포에 상당히 유사 자질을 가진 1-3 IPS 세포를 생성하는 재설정 될 수 있다고 2006 년에 발견은 약물 발견, 세포 치료와 기초 연구를위한 pluripotent 세포의 중요한 새로운 소스를 만들었습니다.
GIBCO 미디어 및 시약 년 동안 pluripotent 줄기 세포 연구의 선두에있다. DMEM가 마네 세럼 교체와 보충 마네는 배아 줄기 세포의 성장과 지금은 IPS 세포 배양 3-9위한 최고의 매체입니다. 이 황금 표준 미디어 시스템은 이제 마네의 SR 성장 팩터 칵테일의 추가와 함께 피더 무료 문화 사용할 수 있습니다.
전통적인 인간의 ES와 IPS의 세포 배양 방법은 마우 스나 인간 fibroblast 피더 레이어의 사용 또는 피더 – 에어컨 매체를 필요로합니다. 이러한 문화 방법은 규모에 노동 집약, 하드 있으며, 그것은 정의되지 않은 상황으로 인해 undifferentiated 허리의 세포를 유지하기 어렵습니다. Invitrogen은 여전히 마네의 SR의 사용을 유지하면서 쉽게 전환하여 엉덩이와 hES 세포 문화를 피더없는 수 있도록 마네의 SR 성장 팩터 칵테일을 개발했습니다.
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Knockout DMEM/F12 | 12660-012 | Note: see appendix for the use of alternative DMEM products GlutaMAX-I (Cat. No. 35050-061) | ||
KnockOut Serum Replacement | 10828-028 | |||
KnockOut Serum Replacement Growth Factor Cocktail | A10580-01 | |||
FGF-basic, human recombinant protein, 10 μg | PHG0024 | Note: see appendix for alternative bFGF pack sizes. | ||
2-Mercaptoethanol | 21985-023 | |||
Dispase | 17105-041 | Note: see appendix for alternative passaging methods | ||
Geltrex hESC-Qualified Reduced Growth Factor Basement Matrix, 1 mL | A10480-01 | |||
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (D-PBS) without calcium and magnesium | 14190-144 | |||
DMSO, 500mL | JT Baker | JT9224-1 | ||
Sterile Tissue Culture Hood | ||||
Incubator set at 37°C | ||||
Pipette-Aid | ||||
Water Bath set at 37°C | ||||
Sterile serological pipettes (5 mL, 10 mL) | ||||
Centrifuge | ||||
15 mL centrifuge tubes | ||||
60 mm Tissue Culture treated dishes | ||||
Liquid nitrogen storage tank | ||||
Isopropanol freezing containers | ||||
1.5 mL Cryovials |