विशिष्ट प्रतिजन Vivo में हत्या CFSE लेबल टारगेट कक्ष का उपयोग परख
Summary
कई संक्रमण एक मजबूत सीटीएल प्रतिक्रिया प्रकाश में लाना है, लेकिन कभी कभी, जवाब कोशिकाओं की मात्रा रोगज़नक़ का नियंत्रण नहीं सहसंबंधी करता है<sup> 1</sup>. सीटीएल गुणवत्ता का एक उपाय उनके लिए विशेष रूप से मार करने की क्षमता है<sup2></sup>. लक्ष्य कोशिकाओं के CFSE लेबलिंग इस सीटीएल प्रतिक्रिया की गुणवत्ता की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है<em> Vivo में</em<sup3,4></sup>.
Abstract
Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl एस्टर (CFSE) आसानी से और जल्दी के लिए vivo जांच में ब्याज की एक सेल की आबादी लेबल करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. यह लेबलिंग प्रतिष्ठित प्रसार और प्रवास का अध्ययन किया गया. यहाँ प्रस्तुत विधि में, हम गोद लेने के लिए और मिलान विशिष्ट CFSE लेबल लक्ष्य 4-6 कोशिकाओं के अस्तित्व और हत्या पर देखने के लिए स्थानांतरण के बाद इस समय छोटा है. CD8 + टी सेल क्लोन के विशिष्ट हत्या के स्तर प्रतिक्रिया की गुणवत्ता का संकेत, के रूप में उनकी मात्रा को गुमराह किया जा सकता है सकते हैं. विशिष्ट CD8 + टी कोशिकाओं कार्यात्मक थक cytokine उत्पादन और 7,8 हत्या में गिरावट के साथ समय पर बन सकता है . इसके अलावा, कुछ CD8 + टी सेल क्लोनों के रूप में दूसरों के रूप में में अच्छी तरह से भिन्न TCR 9 specificities के साथ नहीं मार सकता. प्रभावी सेल मध्यस्थता प्रतिरक्षण (CMI) के लिए, प्रतिजनों की पहचान हो सकता है कि टी कोशिकाओं जवाब न केवल पर्याप्त संख्या में उत्पादन करना चाहिए, लेकिन यह भी कार्यात्मक मजबूत जवाब टी कोशिकाओं. यहाँ हम दो पेप्टाइड BALB / ग चूहों में विशेष टी सेल क्लोनों का प्रतिशत सेल विशिष्ट हत्या का आकलन करें.
Protocol
Discussion
इस परख के लिए क्लोनल विस्तार सहित कोशिकाओं के proliferative क्षमता की जांच करने के लिए संशोधित किया जा सकता है है, क्योंकि CFSE 10,11 संतान के बीच अपेक्षाकृत समान रूप से विभाजित है. यह भी संभव है CFSE लेबलिंग का उपयोग …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
मैं मुझे प्रतिरक्षाविज्ञानी assays और माउस से निपटने के लिए शुरू करने के लिए Bianca के MOTHE, कार्ला Oseroff, और Marie फ्रांस DelGuercio धन्यवाद देना चाहूंगा. GA अलगानेवाला की प्रयोगशाला में काम एनआईएच एक RO1 – ऐ – +०,७३,५५८ अनुदान, GLRCE 1-U54 – ऐ – 057,153 अनुदान, और अमेरिका ३८२९-06 चारण के द्वारा वित्त पोषित है.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 1 mm glass beads | Biospec Products | 11079110 | ||
| 70 μm cell strainer | BD Falcon | 352350 | ||
| 96-well plate | Costar | 3799 | ||
| Adjulite Incomplete Freund’s Adjuvant | Pacific Immunology | n/a | ||
| DMSO | Sigma | D-5879 | ||
| FBS | GIBCO | 16000-077 | ||
| FC 500 Flow Cytometer | Beckman Coulter | n/a | ||
| Kontes glass tissue grinder | Kontes | 885300-0015 | ||
| Mini Beadbeater | Biospec Products | n/a | ||
| Needle | B-D | 305175 | ||
| Parafilm “M” | Pechiney Plastic Packaging | PM992 | ||
| Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 157-8 | ||
| PBS | GIBCO | 10010-023 | ||
| PharmLyse lysing reagent | BD Biosciences | 555899 | ||
| RPMI 1640 | GIBCO | 11875-093 | ||
| Syringe | B-D | 309602 | ||
| Vybrant CFSE Kit | Invitrogen (Molecular Probes) | V12883 |
References
- Blattman, J. N., Wherry, E. J., Ha, S. J., van der Most, R. G., Ahmed, R. Impact of epitope escape on PD-1 expression and CD8 T-cell exhaustion during chronic infection. J Virol. 83 (9), 4386-4394 (2009).
- Jenkins, M. R., Tsun, A., Stinchcombe, J. C., Griffiths, G. M. The strength of T cell receptor signal controls the polarization of cytotoxic machinery to the immunological synapse. Immunity. 31 (4), 621-631 (2009).
- Ingulli, E. Tracing tolerance and immunity in vivo by CFSE-labeling of administered cells. Methods Mol Biol. 380, 365-376 (2007).
- Durward, M. A., Harms, J., Magnani, D. M., Eskra, L., Splitter, G. A. Discordant Brucella melitensis antigens yield cognate CD8+ T cells in vivo. Infect Immun. 78 (1), 168-176 (2010).
- Lyons, A. B., Parish, C. R. Determination of lymphocyte division by flow cytometry. J Immunol Methods. 171 (1), 131-137 (1994).
- Weston, S. A., Parish, C. R. New fluorescent dyes for lymphocyte migration studies. Analysis by flow cytometry and fluorescence microscopy. J Immunol Methods. 133 (1), 87-97 (1990).
- Akondy, R. S. The yellow fever virus vaccine induces a broad and polyfunctional human memory CD8+ T cell response. J Immunol. 183 (12), 7919-7930 (2009).
- Wallace, P. K. Tracking antigen-driven responses by flow cytometry: monitoring proliferation by dye dilution. Cytometry A. 73 (11), 1019-1034 (2008).
- Labadi, A., Balogh, P. Differential preferences in serosal homing and distribution of peritoneal B-cell subsets revealed by in situ CFSE labeling. Int Immunol. 21 (9), 1047-1056 (2009).
- Suffner, J. Dendritic cells support homeostatic expansion of Foxp3+ regulatory T cells in Foxp3.LuciDTR mice. J Immunol. 184 (4), 1810-1820 .
