Een inleiding tot Worm Lab: van kweken van Worms naar Mutagenesis
Summary
Screening voor mutanten met fenotypische afwijkingen is een eenvoudige methode voor het identificeren van genen die functie in een bepaald biologisch proces. In dit artikel beschrijven we hoe u de cultuur vrij levende wormen (bv.<em> Pristionchus pacificus</em>) In het laboratorium en tonen twee verschillende mutagenese methoden, EMS en TMP / UV.
Abstract
Dit protocol beschrijft procedures voor het onderhouden nematoden in het laboratorium en hoe je ze mutagenize met behulp van twee alternatieve methoden: ethylmethaansulfonaat (EMS) en 4, 5 ', 8-trimethylpsoralen in combinatie met ultraviolet licht (TMP / UV). Nematoden zijn krachtige biologische systemen voor genetische studies omwille van hun eenvoudige bouwplan en de paring systeem, dat bestaat uit zelf-bemesting hermafrodieten en mannetjes die kan genereren honderden nakomelingen per dier. Nematoden worden onderhouden in agar platen met een gazon van bacteriën en kan gemakkelijk worden overgedragen van de ene plaat naar de andere met behulp van een pick. EMS is een alkylerend middel vaak gebruikt om puntmutaties en kleine deleties veroorzaken, terwijl de TMP / UV voornamelijk veroorzaakt verwijderingen. Afhankelijk van de soort nematode wordt gebruikt, zal de concentratie van EMS en TMP moeten worden geoptimaliseerd. Te isoleren recessieve mutaties van de nematode Pristionchus pacificus, werden de dieren van de F2-generatie visueel gescreend fenotypes. Ter illustratie van deze methoden, we gemutageniseerd wormen en zocht naar Ongecoördineerde (UNC), Dumpy (dpy) en de transformator (Tra) mutanten.
Protocol
Discussion
Mutagenese is een grote schaal wordt toegepast techniek voor genetische studies in verschillende experimentele model organismen. Mutagenese experimenten worden vaak gebruikt om de functie van een gen twee te identificeren. De mutagenese hier beschreven procedures kan worden gebruikt, niet alleen voor P. pacificus, maar ook voor C. elegans en andere verwante soorten aaltjes. Hier beschrijven we twee methodes, EMS en TMP / UV mutagenese.
EMS is een chemische stof d…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dit werk werd gefinancierd door NSF subsidie IOB # 0615996.
References
- Brenner, S. . 유전학. 77 (1), 71-71 (1974).
- Anderson, P. . Methods Cell Biol. 48, 31-31 (1995).
- Yandell, M. D., Edgar, L. G., Wood, W. B. . Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (4), 1381-1381 (1994).
- Pires-daSilva, A. . WormBook. , 1-1 (2005).
- Kenning, C., Kipping, I., Sommer, R. . J. Genesis. 40 (3), 176-176 (2004).
- Sommer, R. J., Carta, L. K., Kim, S. Y. . Fundamental and Applied Nematology. 19 (6), 511-511 (1996).
- Pires-daSilva, A., Sommer, R. J. . Genes & development. 18 (10), 1198-1198 (2004).
- Wei, A., Yuan, A., Fawcett, G. . Nucleic acids research. 30 (20), 110-110 (2002).
- Jorgensen, E. M., Mango, S. E. . Nat Rev Genet. 3 (5), 356-356 (2002).
