phenotypic 결함과 돌연변이에 대한 심사는 특정 생물 학적 과정에서 기능 유전자를 확인하는 간단한 방법입니다. 이 문서에서 우리는 어떻게 문화 무료 생활 웜 (예에 대한 설명 Pristionchus pacificus) 실험실에서 두 개의 다른 돌연변이 유발 방법, EMS 및 TMP / UV을 보여줍니다.
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방법 논문
웜 실험실 소개 : Culturing 웜에서 돌연변이 유발하는
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
자외선 (TMP / UV)와 함께 에틸 메탄 설 폰 산염 (EMS)와 4, 5 ', 8 trimethylpsoralen :이 프로토콜은 실험실과 방법이 다른 방법을 사용하여 mutagenize에 nematodes을 유지하기 위해 절차를 설명합니다. Nematodes 때문에 자기 비옥하게하는 나온것과 동물마다 자손의 수백을 생성할 수 있습니다 남성 구성되어 있습니다들의 간단한 신체 계획 및 짝짓기 시스템의 유전학 연구에 대한 강력한 생물 학적 시스템입니다. Nematodes는 박테리아의 잔디를 포함하는 한천 플레이트에 유지되며 쉽게 한 접시에서 선택을 사용하여 다른 전송할 수 있습니다. TMP / UV 주로 삭제를 유도하면서 EMS는 일반적으로 포인트 돌연변이와 작은 삭제를 유도하는 데 사용 alkylating 요원입니다. 사용중인 선충류의 종류에 따라, EMS 및 TMP의 농도 최적화해야합니다. 선충류 Pristionchus의 pacificus의 열성 변이를 분리하려면 F2 세대의 동물은 시각 phenotypes에 대한 상영되었다. 이러한 방법을 설명하기 위해, 우리는 벌레를 mutagenized 및 Uncoordinated (UNC), 덤피 (Dpy)와 변압기 (트라) 돌연변이에 대한 보았다.
프로토콜
1 부 : 준비 선충류의 성장 미디어 (NGM) 페트리 접시
이러한 C. 엘레간스 및 P.으로 실험 nematodes pacificus은 일반적으로 선충류 성장 매체 (NGM) 1을 포함 6cm 페트리 접시에 연구실에 양식 있습니다. 웜 20 ° C에 보관하지만, 온도 범위 (° C 넷 사이 - 25 ° C)에서 incubated 수있는 선충류의 종류와 실험 설계에 따라. NGM와 접시를 준비하려면, 표준 살균 기술은 곰팡이와 세균 오염을 방지하는 데 사용해야합니다. 다음은 NGM 번호판을 준비하는 프로토콜입니다 :
- 15g의 한천, 2.4 g NaCl, 2g Tryptone, 그리고 2.72 g KH 2 PO 4 2 패 원뿔형 플라스크에 물, 압력솥 1 L에 볼륨을 만들어하고 60 물을 욕조에 몸을 ° C를 냉각 허용 무게.
- 0.8 ML 1 M CaCl 2의 각 콜레스테롤 추가 (5 MG / 에탄올에 ML), 1 M MgSO 4. 곰팡이와 박테리아 오염 1 ML의 스트렙토 마이신 (100 MG / ML)과 1ml nystatin (10 MG / ML) 방지하....
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토론
돌연변이 유발 다양한 실험 모델 생물의 유전자 연구 널리 고용 기법입니다. 돌연변이 유발 실험은 종종 유전자 2의 기능을 식별하는 데 사용됩니다. 여기에 설명된 돌연변이 유발 절차 P.을 위해뿐만 아니라 사용할 수 있습니다 pacificus뿐만 아니라, C.위한 엘레간스 및 기타 관련 선충류 종. 여기서 우리는 두 가지 방법, EMS 및 TMP / UV 돌연변이 유발을 설명합니다.
EMS는 게놈에 걸쳐 3,8 점 돌연변이 또는 작은 삭제를 유도 화학입니다. Psoralen 돌연변이 유발 (TMP / UV)은 주로 자외선에 의해 유도 가능한 파손에 의한 DNA의 삭제 변이를 유도. 삭제 조각의 길이는 3 0.10-15 kb 범위에서 일반적으로있다.
우리는 찾을 수 일반화되어 phenotypes에 대한 검사. F2 동물 각.......
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공개 사항
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
감사의 글
이 작품은 NSF 교부금 IOB # 0,615,996에 의해 재정 지원되었다.
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참고문헌
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재인쇄 및 허가
