מבוא מעבדה תולעת: מ תולעים culturing כדי mutagenesis
Summary
הקרנת עבור מוטנטים עם מומים פנוטיפי היא שיטה פשוטה לזיהוי גנים פונקציה בתהליך ביולוגי נתון. במאמר זה אנו מתארים כיצד לשחרר את התרבות תולעים חיים (למשל,<em> Pristionchus פקיפיקוס</em>) במעבדה ולהראות שתי שיטות mutagenesis שונים, EMS ו-tmp / UV.
Abstract
פרוטוקול זה מתאר את ההליכים כדי לשמור על נמטודות במעבדה וכיצד mutagenize אותם באמצעות שתי שיטות חלופיות: sulfonate מתאן אתיל (EMS) ו – 4, 5 ', 8-trimethylpsoralen בשילוב עם אור אולטרה סגול (TMP / UV). נמטודות הן מערכות ביולוגיות עוצמה עבור מחקרים בגנטיקה בגלל תוכנית פשוטה הגוף שלהם ואת מערכת הרבייה, המורכבת עצמית זבול הרמפרודיטים וזכרים כי ניתן להפיק מאות צאצאים לכל בעלי החיים. נמטודות נשמרות צלחות אגר המכיל דשא של חיידקים ניתן להעביר בקלות מהצלחת אחד למשנהו באמצעות להרים. EMS הוא סוכן אלקילציה נפוץ לגרום מוטציות נקודתיות ומחיקות קטן, בעוד tmp / UV גורמת בעיקר מחיקות. בהתאם מינים של נמטודות בשימוש, ריכוזים של EMS ו TMP יהיה חייב להיות מותאם. כדי לבודד מוטציות רצסיביות של פקיפיקוס נמטודות Pristionchus, בעלי חיים של דור F2 הוקרנו חזותית עבור פנוטיפים. כדי להמחיש את השיטות הללו, אנו mutagenized תולעים וחיפשתי מתואמים (UNC), גוצה (Dpy) ו שנאי (טרה) מוטנטים.
Protocol
Discussion
Mutagenesis היא טכניקה מועסקים נרחב עבור מחקרים גנטיים שונים של אורגניזמים מודל ניסיוני. ניסויים mutagenesis משמשים לעתים קרובות כדי לזהות את הפונקציה של הגן 2. הנהלים mutagenesis המתואר כאן ניתן להשתמש לא רק על פ פקיפיקוס, אלא גם עבור ג אלגנס ושאר מיני נמטודות בנושא. ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו כבר ממומן על ידי NSF מענק IOB # 0615996.
References
- Brenner, S. . 유전학. 77 (1), 71-71 (1974).
- Anderson, P. . Methods Cell Biol. 48, 31-31 (1995).
- Yandell, M. D., Edgar, L. G., Wood, W. B. . Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (4), 1381-1381 (1994).
- Pires-daSilva, A. . WormBook. , 1-1 (2005).
- Kenning, C., Kipping, I., Sommer, R. . J. Genesis. 40 (3), 176-176 (2004).
- Sommer, R. J., Carta, L. K., Kim, S. Y. . Fundamental and Applied Nematology. 19 (6), 511-511 (1996).
- Pires-daSilva, A., Sommer, R. J. . Genes & development. 18 (10), 1198-1198 (2004).
- Wei, A., Yuan, A., Fawcett, G. . Nucleic acids research. 30 (20), 110-110 (2002).
- Jorgensen, E. M., Mango, S. E. . Nat Rev Genet. 3 (5), 356-356 (2002).
