Introduzione al Laboratorio Worm: da Worms coltura a mutagenesi

Summary

Screening per mutanti con difetti fenotipici è un metodo semplice per identificare i geni che funzionano in un dato processo biologico. In questo articolo descrivono come i vermi che vivono la cultura libera (ad esempio,<em> Pristionchus pacificus</em>) In laboratorio e mostrano due differenti metodi di mutagenesi, EMS e TMP / UV.

Abstract

Questo protocollo descrive le procedure per mantenere nematodi in laboratorio e come mutagenize utilizzando due metodi alternativi: metano solfonato etilico (EMS) e 4, 5 ', 8-trimethylpsoralen combinata con la luce ultravioletta (TMP / UV). I nematodi sono potenti sistemi biologici per gli studi di genetica a causa del loro piano di corpo semplice e il sistema di accoppiamento, che è composto di auto-fertilizzazione ermafroditi e maschi in grado di generare centinaia di progenie per animale. I nematodi sono mantenuti in piastre di agar contenente un prato di batteri e può essere facilmente trasferito da un piatto all'altro con un plettro. EMS è un agente alchilante comunemente usato per indurre mutazioni puntiformi e piccole delezioni, mentre TMP / UV induce soprattutto le eliminazioni. A seconda della specie di nematode usato, le concentrazioni di EMS e TMP dovrà essere ottimizzato. Per isolare mutazioni recessive del pacificus nematode Pristionchus, gli animali della generazione F2 erano visivamente sottoposti a screening per fenotipi. Per illustrare questi metodi, abbiamo mutagenizzate worm e cercato non coordinate (Unc), Dumpy (DPY) e trasformatore (Tra) mutanti.

Protocol

Parte 1: Preparazione di terreni di crescita nematode (NGM) piastre Petri Nematodi sperimentali come C. elegans e P. pacificus sono tipicamente coltivate in laboratorio su 6 centimetri piastre Petri contenenti crescita media dei nematodi (NGM) 1. I worm sono mantenuti a 20 ° C, ma può essere incubate a una gamma di temperature (tra i 4 ° C – 25 ° C), a seconda della specie di nematodi e il disegno sperimentale. Per preparare piatti con NGM, tecniche standard di…

Discussion

Mutagenesi è una tecnica ampiamente utilizzata per gli studi genetici in diversi organismi modello sperimentale. Esperimenti di mutagenesi sono spesso utilizzati per identificare la funzione di un gene ^2. Le procedure di mutagenesi qui descritto può essere utilizzato non solo per P. Pacifico, ma anche per la C. elegans ed altre specie di nematodi correlati. Qui si descrivono due metodi, EMS e TMP / UV mutagenesi.

EMS è una sostanza chimica che induce mutazioni…