En introduktion till Worm Lab: från Odling Worms till Mutagenesis
Summary
Screening för mutanter med fenotypisk defekter är en enkel metod för att identifiera gener som fungerar i en viss biologisk process. I denna artikel beskriver vi hur kultur fritt levande maskar (t ex<em> Pristionchus pacificus</em>) I laboratoriet och visar två olika mutagenes metoder, EMS och TMP / UV.
Abstract
Detta protokoll beskriver förfaranden för att upprätthålla nematoder i laboratoriet och hur man mutagenize dem med två alternativa metoder: etyl metan sulfonat (EMS) och 4, 5 ', 8-trimethylpsoralen kombination med ultraviolett ljus (TMP / UV). Nematoder är kraftfulla biologiska system för genetik studier på grund av deras enkla kropp plan och parning, som består av självbefruktande hermafroditer och hannar som kan generera hundratals avkommor per djur. Nematoder hålls i agarplattor innehållande en gräsmatta av bakterier och kan lätt överföras från en tallrik till en annan med en pick. EMS är ett alkylerande medel används ofta för att framkalla punktmutationer och mindre deletioner, medan TMP / UV främst inducerar strykningar. Beroende på arter av nematoder som används, kommer halterna av EMS och TMP måste optimeras. Att isolera recessiva mutationer i nematoden Pristionchus pacificus var djur av F2-generationen visuellt screenas för fenotyper. För att illustrera dessa metoder, mutagenized vi maskar och letade efter Icke samordnade (UNC), Dumpy (Dpy) och Transformator (TRA) mutanter.
Protocol
Discussion
Mutagenes är en allmänt används teknik för genetiska studier i olika experimentella modeller organismer. Mutagenes experiment används ofta för att identifiera funktionen av en gen 2. Den mutagenes förfaranden som beskrivs här kan användas inte bara för P. pacificus, men också för C. elegans och andra närbesläktade arter nematoder. Här beskriver vi två metoder, EMS och TMP / UV-mutagenes.
EMS är en kemikalie som inducerar punktmutationer eller sm?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Detta arbete har finansierats av NSF bevilja IOB # 0.615.996.
References
- Brenner, S. . 유전학. 77 (1), 71-71 (1974).
- Anderson, P. . Methods Cell Biol. 48, 31-31 (1995).
- Yandell, M. D., Edgar, L. G., Wood, W. B. . Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91 (4), 1381-1381 (1994).
- Pires-daSilva, A. . WormBook. , 1-1 (2005).
- Kenning, C., Kipping, I., Sommer, R. . J. Genesis. 40 (3), 176-176 (2004).
- Sommer, R. J., Carta, L. K., Kim, S. Y. . Fundamental and Applied Nematology. 19 (6), 511-511 (1996).
- Pires-daSilva, A., Sommer, R. J. . Genes & development. 18 (10), 1198-1198 (2004).
- Wei, A., Yuan, A., Fawcett, G. . Nucleic acids research. 30 (20), 110-110 (2002).
- Jorgensen, E. M., Mango, S. E. . Nat Rev Genet. 3 (5), 356-356 (2002).
