Протокол Анализы RNAi у взрослых комаров (А. gambiae)
Summary
Обратные генетические подходы оказались чрезвычайно полезными для определения того, какие гены лежащие в основе сопротивления вектора патогенов в комаров. Это видео показывает протокол метод, используемый Dimopoulos лаборатории, чтобы придать дсРНК в Anopheles gambiae комары, которые гавани малярийного паразита. Техника манипуляций инъекции установки и инъекционных дсРНК в грудной клетки показано на рисунке.
Abstract
Обратные генетические подходы оказались чрезвычайно полезными для определения того, какие гены лежащие в основе сопротивления вектора патогенов в комаров. Это видео показывает протокол метод, используемый Dimopoulos лаборатории, чтобы придать дсРНК в Anopheles gambiae комары, которые гавани малярийного паразита. Техника манипуляций инъекции установки и инъекционных дсРНК в грудной клетки показано на рисунке.
Protocol
Discussion
Эффективность генов сильно варьирует и зависит от ряда факторов, включая стенограммы и белка оборот ставок, а дсРНК эффективность поглощения клетками и органами. Мы обнаружили, что глушитель начинает уже через 1 день после инъекции и может длиться до 6 инъекций сообщение дней. Используйте запись и…
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Megascript | kit | Ambion | for dsRNA synthesis; T7 RNA polymerase-mediated in vitro transcription reaction | |
| RNeasy | Qiagen | For dsRNA purification | ||
| dsRNA | should be quantified and adjusted to 3 μg/ μL in water | |||
| fine-tipped forceps | ||||
| glass slide | ||||
| glass microcapillary needles | ||||
| microinjector | Drummond | Nanoject II | ||
| light microscope | mounted above a cold block | |||
| Petri dish | covered, glass | |||
| paper towels | ||||
| 10% sucrose | food | |||
| A. gambiae | Animal | mosquitos |
