一个孤立的视网膜制备，记录从基因标记的视网膜神经节细胞的光反应
Summary
本文提供了一个描述如何从孤立在小鼠视网膜准备的解剖和记录。特别是，我们介绍了如何从一个荧光标记的神经节细胞的人口记录对光反应和随后查明并分析其形态。
Abstract
在脊椎动物视觉第一步骤，当光线刺激视网膜 1杆和锥光感受器。然后将这些信息分割成ON和OFF通路。光感受器信号光信息的双极细胞（BCS），其中光照强度的增加（BCS）的或减少（关BCS）去极化响应。这种光信息的隔离是保持在视网膜神经节细胞（RGC的），其中有分层内网状层（IPL），他们收到来自关闭的BC直接兴奋输入关sublamina的树突的水平，或分层在sublamina的彩光，他们收到直接的兴奋性输入在边界条件。这隔离的关于增加或减少照明（开启和关闭途径）的信息是守恒的，并暗示大脑平行。
RGC的是输出的视网膜细胞，因而是一个重要的细胞，以研究，以了解如何在大脑中的视觉核信号光信息。在过去几十年的小鼠遗传学的进展，导致各种具体的研资局的人群是一种荧光蛋白标记，以便研资局亚型 2 3 4和电生理记录针对特定的识别荧光记者鼠标线。在这里，我们提出了一种用于记录从一个完整的，孤立的视网膜准备荧光标记的神经节细胞的光反应的方法。这个与世隔绝的视网膜准备允许来自视网膜神经节细胞树突状乔木是否完好，并保留在整个研资局的树突状乔木输入录音。这种方法适用于跨多种神经节细胞亚型，是适合各种各样的单细胞的生理技术。
Protocol
Discussion
这种技术适用于任何一个孤立的视网膜视网膜神经节细胞的录音。虽然在本质上感光上面使用鼠标线，黑视素的表达RGC的标记与EGFP 2，5，这个协议很容易转移到其他荧光标记的研资局线或可广义纪录，以及从随机选取的视网膜神经节细胞。这种技术是特别有价值的，因为每个研资局和其各自的输入神经元的树突状乔木留下完全完好无损。录音可以很容易地在电流或电压钳模式下，细胞贴?…
Acknowledgements
这项工作是支持部分由美国国立卫生研究院R01EY012949，R21EY018885，T32 EY0707133赠款。我们感谢他的技术援助达尔文坑。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Ames’ Medium | Sigma | A1420 | ||
| Collagenase | Whorthington Biochemical | LS005273 | ||
| Hyaluronidase | Whorthington Biochemical | LS002592 | ||
| Sodium Bicarbonate | Sigma | S5761 | ||
| AlexaFluor 594 Hydrazyde | Invitrogen | A10442 | ||
| Neurobiotin | Vector Laboratories | SP1120 | ||
| Electrodes | Sutter Instruments | BF120-69-10 | ||
| Forceps | Fine Science Tools | 11252-30 | ||
| Ophthalmologic Scissor | Fine Science Tools | 15000-00 | ||
| Streptavidin 594 | Invitrogen | S32356 | ||
| Vectashield | Vector Laboratories | H-1000 | ||
| Goat Serum | Jackson ImmunoResearch | 005-000-001 | ||
| Triton X-100 | Sigma | T8787 | ||
| Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 19210 |
References
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