Bu makale, fare izole retinal hazırlanması incelemek ve kaydetmek için nasıl bir açıklama sağlar. Özellikle, floresan etiketli ganglion hücre popülasyonu ışık yanıtlarını kaydetmek ve daha sonra belirlemek ve morfolojisi analiz nasıl açıklar.
Abstract
Işık retina 1 çubuk ve koni fotoreseptörlerin uyarır, omurgalı vizyonu ilk adımları yer almaktadır. Bu bilgiler daha sonra ON ve OFF yollar olarak bilinen ayrılmış;. Bipolar hücreler, ışık şiddeti artar (BCS Açık) veya azalır (BCS Kapalı) yanıt olarak depolarize fotoreseptörlerin sinyal ışık bilgi (BCS). Işık bilgi bu ayrımı Kapalı BCS doğrudan eksitatör giriş alırsınız iç pleksiform katman (IPL), ya da Kapalı sublamina tabakalandırılması dendritler retina ganglion hücrelerinin (RGCs) seviyesinde tutulur, ya da içinde tabakalandırılması BCS Açık doğrudan eksitatör giriş alırsınız IPL Açık sublamina. Aydınlatma (Açık ve Kapalı yollar) olarak artar veya azalır ile ilgili bilgiler bu ayrımı paralel olarak korunmuş ve beyne sinyal.
RGCs retinanın çıkış hücreleri, ve böylece ışık bilgileri beynin görme çekirdekleri sinyal nasıl anlamak için çalışma önemli bir hücre. Son on yılda fare genetik gelişmeler, özel RGC nüfus elektrofizyolojik kayıt için hedef RGC alt tipleri 2 3 4 ve özel kimlik izin vermek için floresan protein etiketli floresan muhabiri fare hatları çeşitli sonuçlandı . Burada, sağlam bir, izole retinal hazırlanmasında floresan etiketli ganglion hücrelerinin ışık yanıtları kaydetmek için bir yöntem mevcut. Bu izole retinal dendritik mili sağlam ve tüm RGC dendritik mili boyunca girişler korunur RGCs kayıtları için hazırlık sağlar. Bu yöntem, ganglion hücre alt tiplerinin çeşitli çapında geçerli ve tek hücreli fizyolojik teknikler geniş bir yelpazede uygun.
Protocol
Hayvan Kullanım Bildirimi: Hayvanlar, Minnesota Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu Üniversitesi tarafından onaylanan protokolleri kullanarak, Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım Kılavuzu açıklanan kurallarına uygun olarak bakıldı . 1) Hazırlık çözümler Elektrofizyolojik kayıt yapmadan önce, hücre içi, ekstrasellüler ve enzim çözümleri hazırlıklı olması gerekiyor. Ekstrasellüler çözüm: 1 litre ve 1.9 …
Discussion
Bu teknik, izole bir retina herhangi bir retina ganglion hücre kayıtları geçerlidir. Yukarıda kullanılan fare doğrultusunda rağmen özünde ışığa, melanopsin ifade RGCs EGFP 2, 5 ile etiketlenir, bu protokol floresan ile işaretlenmiş diğer RGC hatları kolayca devredilemez veya yanı sıra rastgele seçilen RGCs kayıt jeneralize olabilir. Bu teknik, her RGC ve ilgili giriş nöronların dendritik mili tamamen değişmeden kalır, çünkü özellikle değerlidir. Kayıtları, akım veya gerilim…
Acknowledgements
Bu çalışma NIH R01EY012949, R21EY018885, T32 EY0707133 hibe kısmen desteklenmiştir. Darwin'in asın Biz onun teknik yardım için teşekkür ederim.
Schmidt, T. M., Kofuji, P. An Isolated Retinal Preparation to Record Light Response from Genetically Labeled Retinal Ganglion Cells. J. Vis. Exp. (47), e2367, doi:10.3791/2367 (2011).